Identyfikacja i wykrywanie Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae na Anthurium andreanum

• Autorzy: Pulawska J. , Kordyla-Bronka M. , Sobiczewski P. , Orlikowski L.B.

Warianty tytułu

EN

Identification and detection of Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae on Anthurium andreanum

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

W lipcu 2007 roku, w komercyjnych uprawach szklarniowych Anthurium andreanum w centralnej Polsce obserwowano objawy podobne do bakteryjnej plamistości. Z obrzeża plam chorobowych na liściach wyizolowano bakterie tworzące żółte kolonie na pożywkach YPGA i King’s B. Izolaty zostały zidentyfikowane jako Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae (Xad) klasycznym testem immunofluorescencji z zastosowaniem przeciwciał poliklonalnych (Prime Diagnostics, Xcd (1104) I-9831-01). Identyfikację potwierdzono również techniką PCR z zastosowaniem starterów pozwalających na klasyfikację bakterii do rodzaju Xanthomonas oraz nestedPCR (zagnieżdżonego PCR) z dwiema parami starterów PXad i NXad specyficznymi dla Xad. Patogeniczność izolatów potwierdzono na roślinach anturium, na których po 10 dniach ze zmienionych chorobowo miejsc reizolowano bakterie, a ich identyczność z Xad potwierdzono testem PCR ze starterami NXad i PXad. Podjęto próbę opracowania metody wykrywania Xad w materiale roślinnym z zastosowaniem techniki PCR i starterów PXad i NXad. Testowano trzy sposoby przygotowania próbki i izolacji DNA bakteryjnego w celu uzyskania jak największej czułości wykrywania patogena. Stwierdzono, że metoda uwzględniająca 3-dniową preinkubację wyizolowanych z roślin bakterii na podłożu YPGA i izolację DNA bakteryjnego metodą lizy alkalicznej pozwoliła na najbardziej czułe wykrywanie Xad, to jest 1 jtk na próbkę.

EN

The symptoms of bacterial blight were observed on Anturium andreanum in commercial greenhouses in central Poland, in July 2007. From the margins of diseased tissue on leaves, yellow colony-forming bacteria were isolated on YPGA and King’s B media. Bacteria were identified as Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae (Xad) by classical immunofluorescence test (IF) using the polyclonal antibodies (Prime Diagnostics, Xcd (1104) I-9831-01). Isolates were identified as Xanthomonas sp. by PCR with primers X1 and X2 and as Xad by PCR using two primer pairs, PXad and NXad. Pathogenicity of the isolates was tested on healthy anturium plants. Ten days after inoculation, bacteria were re-isolated from diseased plant tissue and they were identified as X. axonopodis pv. dieffenbachiae using PCR with NXad and PXad primers. An attempt was made to work out the method of Xad detection in plant tissue using nested-PCR with primers PXad and NXad. Three methods of sample preparation were tested. The method including preincubation of bacteria isolated from plant tissue on YPGA medium for 3 days, DNA isolation and two-round nested PCR enabled the detection of 1 Xad cfu⋅ml⁻¹.

Słowa kluczowe

PL

Anthurium andreanum; anturium; bakteryjna plamistosc anturium; choroby bakteryjne; choroby roslin; czynniki chorobotworcze; identyfikacja; izolacja; lancuchowa reakcja polimerazy; rosliny ozdobne; wykrywanie; Xanthomonas axanopodis pv.dieffenbachiae

EN

Anthurium andreanum; anthurium; Anthurium; bacterial disease; plant disease; pathogenic factor; identification; isolation; polymerase chain reaction; ornamental plant; detection; Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae

• Wydawca: -
• Czasopismo: Zeszyty Problemowe Postępów Nauk Rolniczych
• Rocznik: 2008
• Tom: 529
• Opis fizyczny: s.167-173,fot.,bibliogr.

Twórcy

autor

Pulawska J.

• Instytut Sadownictwa i Kwiaciarstwa, ul. Pomologiczna 18, 96-100 Skierniewice

autor

Kordyla-Bronka M.

• Główny Inspektorat Państwowej Inspekcji Ochrony Roślin i Nasiennictwa, Centralne Laboratorium w Toruniu

autor

Sobiczewski P.

• Instytut Sadownictwa i Kwiaciarstwa, ul. Pomologiczna 18, 96-100 Skierniewice

autor

Orlikowski L.B.

• Instytut Sadownictwa i Kwiaciarstwa, ul. Pomologiczna 18, 96-100 Skierniewice

Bibliografia

• ANONIM. 2004. EPPO Diagnostic protocols for regulated pests - PM 7/23, Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae. Bulletin OEPP/EPPO Bulletin 34: 183-186.
• GUILFORD P.J., TAYLOR R.K., CLARK R.G., HALE C.N., FORSTER R.L.S. 1996. PCR-based techniques for the detection of Erwinia amylovora. Acta Hort. 411: 53-56.
• KING E.O., WARD M.K., RANEY D.E. 1954. Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescein. J. Lab. Med.: 44: 693-695.
• LOPEZ M.M., GORRIS M.T., LLOP P., CUBERO J., VICEDO B., CAMBRA M. 1997. Selective enrichment improves the isolation, serological and molecular detection of plant pathogenic bacteria, w: Diagnosis and identification of plant pathogens. H.W. Dehne, G. Adam, M. Diekmann, J. Frahm, A. Mauler-Machnik, P. van Halteren (red.). Kluwer Academic Publishers: 117-121.
• MAES M. 1993. Fast classification of plant-associated bacteria in the Xanthomonas genus. FEMS Microbiology Letters 113: 161-166.
• PUŁAWSKA J., SOBICZEWSKI P. 2002. Detection of Erwinia amylovora in and on apple tissue using PCR. Acta Hort. 590: 163-166.
• PUŁAWSKA J., SOBICZEWSKI P. 2005. Development of a semi-nested PCR based method for sensitive detection of tumorigenic Agrobacterium in soil. J. Appl. Microbiol. 98: 710-721.
• PUŁAWSKA J., KORDYLA-BRONKA M., JOUEN E., ROBENE-SOUSTRADE I., GAGNEVIN L., PRUVOST O., SOBICZEWSKI P., ORLIKOWSKI L. 2008. First report of bacterial blight of Anthurium andreanum in Poland. Plant Pathology 57: 775.
• ROBČNE-SOUSTRADE I., LAURENT P., GAGNEVIN L., JOUEN E., PRUVOST O. 2006. Specific detection of Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae in Anthurium (Anthurium andreanum) tissues by nested PCR. Appl. Environ. Microbiol. 72: 1072-1078.
• SCHAAD N.W., CHEONG S.S., TAMAKI S., HATZILOUKAS T., PANOPOULOS N.J. 1995. A combined biological and enzymatic amplification (BIO-PCR) technique to detect Pseudomonas syringae pv. phaseolicola in bean seed extracts. Phytopathology 85: 243-248.