PL
Ostropest plamisty - Silybum marianum (L.) Gaertn. - jest rośliną z rodziny złożonych (Astraceae), która stanowi cenny surowiec dla przemysłu farmaceutycznego. Owoce tej rośliny (nasiona) są bogatym źródłem flawonolignanów - sylibiny, sylidianiny oraz sylikrystyny - stosowanych przy produkcji leków ochraniających i regenerujących tkankę wątroby. Podobnie jak w przypadku wielu innych gatunków roślin wykorzystywanych w medycynie, ostropest plamisty jest przedmiotem zainteresowania biotechnologów. Wynikiem tego może być możliwość zwiększenia zawartości związków biologicznie czynnych, dzięki ukierunkowanym modyfikacjom genetycznym. Przeprowadzono badania nad izolacją, kulturą i regeneracją oraz transformacją protoplastów mezofilowych tego gatunku. Protoplasty izolowano z liści dwutygodniowych sterylnych siewek. Po oczyszczeniu i immobilizacji w alginianie wapnia utrzymywano je w płynnych pożywkach Murashige i Skoog (MS) lub Kao i Michayluka (K8p), zawierających różne kombinacje i stężenia BAP, NAA, 2,4-D oraz od 0,35 do 0,45 M sacharozy. Następnie protoplasty poddawano działaniu mieszaniny od 5 do 20% PEG-u oraz trawionego DNA plazmidowego zawierającego gen β-glukuronidazy (GUS). Protoplasty inkubowano w szoku termicznym, w lodzie oraz w temperaturze pokojowej, przez 5-30 minut. Następnie poddawano je inkubacji z substratem x-gluc, w temperaturze 37°C, przez 15 min do 1 godziny. Obserwowano niebieskie zabarwienie transformowanych protoplastów, świadczące o pozytywnym wyniku transformacji.
EN
Saint Mary's thistle - Silybum marianum (L.) Gaertn. - belonging to Asteraceae family is a very important plant in pharmaceutical industry. Seeds of this plant contain complex of flavonolignans - silybin, silydianin and silychristin - which are used in production of medicines that protect and regenerate liver cells. As in the case of many other medicinal plants, biotechnologists are interested in milk thistle. Thanks to genetics modifications it may be possible to increase the level of biologically active compounds. Procedures of isolation and regeneration of mesophyll protoplast of milk thistle were tested. This is one of the first reports of milk thistle protoplast transformation. Protoplasts were isolated from young leaves (14 days old), subsequently embedded in sodium alginate, placed on MS or K8p mediums with different mineral composition and then cultured. Mediums contained the combinations of BAP, NAA, 2,4-D and 0.35 to 0.45 M sucrose. The transformation of protoplasts was carried out with 5% and 20% polyethylene glycol (PEG) and plasmid DNA, which contained β-glucuronidase gene (GUS). Protoplasts were incubated in the heat shock on the ice and at room temperature for 5-30 minutes. Next protoplasts were incubated with x-gluc substrate at 37°C for 15 minutes to 1 hour. Blue color of transgenic protoplasts was observed which is the proof of a positive result of the transformation.