Nowe metody oznaczania DAPA

• Autorzy: Czauderna M , Kowalczyk J. , Kwiatkowska E.
• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Opracowano metody oznaczania kwasu 2,6-diaminopimelinowego (DAPA) przy użyciu zestawu HPLC (Waters) i kolumny z odwróconą fazą (Nova-Pak C18) poprzez elucję gradientową oraz detekcję UV przy 340 nm lub fluorescencyjną (wzbudzenie 229 nm, detekcja 470 nm). Po hydrolizie próbek DAPA przeprowadzano w pochodne przy użyciu o-ftaldialdehydu (OPA) w obecności 2-merkaptoetanolu (metoda 1) lub OPA w obecności etanotiolu (metoda 2) z ewentualnym usunięciem nadmiaru innych aminokwasów (metoda 3). Metodą 1 można rozdzielić poszczególe izomery DAPA. Na podstawie otrzymanych wyników można wnioskować, że metody 1 i 2 mogą być wystarczająco czułe i selektywne do oznaczania DAPA w bakteriach przy użyciu detekcji UV. Natomiast zastosowanie metody 3 z detekcją fluorescencyjną pozwala uzyskać zadowalające wyniki nawet przy bardzo niskich stężeniach DAPA.

EN

The methods for 2,6-diaminopimelic acid (DAPA) determination were elaborated using HPLC (Waters) set and reversed-phase column (Nova-Pak C18) with gradient elution and UV detection at 340 nm or fluorescence detection (229 nm excitation and 470 nm detection). Samples were hydrolysed and DAPA was derivatised with o-phtaldialdehyde (OPA) in the presence of 2-mercaptoethanol (method 1) or in presence of ethanethiol (method 2) with eventual elimination of the excess of other amino acids (method 3). Using method 1 the DAPA isomers can be determined. It could be concluded that the methods 1 and 2 are satisfactory sensitive and selective for DAPA determination in bacterial material using UV detection while the determination of low DAPA concentration in digestive tract content needs the fluorescence detection.

Słowa kluczowe

PL

kwas 2,6-dwuaminopimelinowy; chromatografia cieczowa wysokosprawna; oznaczanie; metody; probki biologiczne

• Wydawca: -
• Czasopismo: Zeszyty Problemowe Postępów Nauk Rolniczych
• Rocznik: 1998
• Tom: 462
• Opis fizyczny: s.459-466,rys.,tab.,bibliogr.

Twórcy

autor

Czauderna M

• Instytut Fizjologii i Zywienia Zwierzat im. J. Kielanowskiego PAN, ul. Instytucka 3, 05-110 Jablonna

autor

Kowalczyk J.

autor

Kwiatkowska E.

Bibliografia

• Czauderna M., Kowalczyk J. 1999. Determination of 2,6-diaminopimelic acid in bacteria, ruminal and duodenal digesta using HPLC with, fluorescence or UV detection. J. Anim. Feed Sci. (w druku).
• Czerkawski J. 1974. Methods for determining of 2,6-diaminopimelic acid and 2-aminoethylphosphonic acid in gut content. J. Sci. Fd. Agric. 1: 45 - 55.
• Robinson P. H., Fadel J. G., Ivan M. 1996. Critical evaluation of diaminopimelic acid and ribonucleic acid as markers to estimate rumen pools and duodenal flows of bacterial and protozoal nitrogen. Can. J. Anim. Sci. 76: 587 - 597.
• Sarwar G., Botting H. G. 1993. Estimation of liquid chromatographic analysis of nutritionally important amino acids in food and physiological samples. J. Chomatogr. 615: 1 - 22.
• Webster P. M., Hoover W. H., Miller T. K. 1990. Determination of 2,6-diaminopimelic acid in biological materials using high performance liquid chromatography. Anim. Feed Sci. Technol. 30: 11 - 20.