Wykorzystanie wydzielniczych bialek Yop paleczek Yersinia w serologicznej diagnostyce jersiniozy. II. Zastosowanie metody rekombinacji genetycznej do uzyskania bialka YopD

• Autorzy: Rastawicki W. , Gierczynski R. , Jagielski M.

Warianty tytułu

EN

Application of released proteins [RPs] of Yersinia enterocolitica for serological diagnosis of yersiniosis. II. Gene recombination for production of the YopD protein

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Metodami rekombinacji genetycznej uzyskano preparat wydzielniczego białka YopD, który użyto jako antygenu w odczynie ELISA do serologicznej diagnostyki jersiniozy. Wyniki oznaczeń poziomu surowiczych przeciwciał dla tak uzyskanego antygenu pałeczek Yersinia porównano z wynikami oznaczeń uzyskanymi przy użyciu testu ELISA, w którym jako antygenu użyto białek wydzielniczych uzyskanych z supernatantu hodowli Y enterocolitica oraz przy użyciu komercyjnego testu ELISA z rekombinowanym antygenem białkowym. Na podstawie wyników oznaczeń wykazano pełną przydatność uzyskanego we własnym zakresie metodą rekombinacji genetycznej preparatu wy- dzielniczego białka YopD do diagnostyki jersiniozy.

EN

The aim of this study was to evaluate the usefulness of gene recombination technique using the pET-30 Ek/LIC expression vector for production a 36 kDa released protein called YopD and evaluate of this purified protein as antigen in serodiagnosis of yersiniosis. Protein YopD of Y enterocolitica was expressing in Escherichia coli BL21 (DE3) using the pET-30 Ek/LIC expression vector. Purification of the expressed enzyme from suspensions of E. coli cells treated with Bug BusterTM Protein/Extraction Reagent was accomplished by immobilised metal (№2+) affinity column chromatography (His-trap). The IgM, IgG and I gA class antibodies to YopD were measured in 100 serum samples collected from patients suspected for yersiniosis and 100 blood donors. The obtained results were compared to the results of ELISA with released proteins isolated from the culture of Y enterocolitica supernatant under calcium deficient conditions and commercial ELISA with recombinant released proteins. A very high (94.0-100.0%) specificity and good sensitivity (55,2 - 80.4%) were displayed by the ELISA with YopD in relation to other two ELISA. The results of our study showed that recombinant YopD protein purified by chromatography of bio-affinity may be used in serodiagnosis of yersiniosis as a high specific antigen free of Yersinia lipopolysaccharides.

Słowa kluczowe

PL

rekombinacja genetyczna; bialko Yop; choroby czlowieka; diagnostyka serologiczna; preparaty bialkowe; Yersinia enterocolitica; chorobotworczosc; jersynioza; Yersinia pseudotuberculosis

• Wydawca: -
• Czasopismo: Medycyna Doświadczalna i Mikrobiologia
• Rocznik: 2004
• Tom: 56
• Numer: 1
• Opis fizyczny: s.41-47,tab.,bibliogr.

Twórcy

autor

Rastawicki W.

• Panstwowy Zaklad Higieny, ul.Chocimska 24, 00-791 Warszawa

autor

Gierczynski R.

autor

Jagielski M.

Bibliografia

• 1. Aleksie S, Bockemźhl J. Yersinia and other Enterobacteriaceae. W: Manual of clinical microbiology. Red. Murray P. R. American Society for Microbiology, new York 1999,483-91.
• 2. Allaoui A, Woestyn S, Sluiters C, Cornelis GR. YscU, a Yersinia enterocolitica inner membrane protein involved in Yop secretion. J Bacteriol 1994; 176: 4534-42.
• 3. Aulisio CCG, Hill WE, Stanfleld JT, Sellers RL. Evaluation of virulence factor testing and characteristics of pathogenicity in Yersinia enterocolitica. Infect Immun 1983; 40: 330-5.
• 4. Bottone EJ. Yersinia enterocolitica: the charisma continues. Clinic Microbiol Rev 1997; 10: 257-76.
• 5. Gemski P, Lazere JR, Casey T. Plasmid associated with pathogenicity and calcium dependency of Yersinia enterocolitica. Infect Immun 1980; 27: 682-85.
• 6. Heesemann J, Gross U, Schmidt N, Laufs R. Immunochemical analysis of plasmid-encoded proteins teleased by enteropathogenic Yersinia sp. grown in calcium-deficient media. Infect Immun 1986, 54: 561- 67.
• 7. Kapperud G, Slome SB. Yersinia enterocolitica infections. W: Bacterial Infections of Humans Epidemiology and Control. Red. Evans AS, Brachman PS, Plenum Medical book Company, New York and London, 1988, 859-70.
• 8. Rastawicki W. Ocena odczynami tradycyjnymi i nowej generacji odpowiedzi humoralnej na antygeny Mycoplasma pneumoniae w przebiegu naturalnego zakażenia u ludzi. I. Występowanie i poziom mykoplazmowych przeciwciał u osób klinicznie zdrowych. Med Dośw Mikrobiol 1995; 47: 35-53.
• 9. Rastawicki, Jagielski M, Gierczyński R. Wykorzystanie wydzielniczych białek YOP pałeczek Yersinia w serologicznej diagnostyce jersiniozy. I. Antygen do odczynu immunoenzymatycznego. Med Dośw Mikrobiol 2003; 55: 125-33.
• 10. Straley SC, Piano GV, Skrzypek E, Bliska JB. Yops of Yersinia spp. Pathogenic for humans. Infect Immun 1993; 61: 3105-10.