Opracowanie warunków immobilizacji kwasu poligalakturonowego jako ligandu w chromatografii powinowactwa enzymów pektynolitycznych

• Autorzy: Ginalska G , Lobarzewski J.
• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

W badaniach wykorzystano technikę kolumnowej cieczowej chromatografii powinowactwa do oczyszczania endopoligalakturonazy E.C. 3.2.1.15. (endo-PG), enzymu używanego przy produkcji soków owocowych. Do wypełnienia kolumn stosowano silanizowane szkło porowate i żel krzemionkowy, a także wytworzone przez pokrycie żelu krzemionkowego keratyną lub poliamidem oraz nośnik organiczny - kopolimer akrylonitrylodiwinylobenzenu. Wiązano je z ligandem - kwasem poligalakturonowym - poprzez grupy karboksylowe i aldehydowe powstałe po otwarciu pierścienia w tym kwasie. Wykazano, że kopolimer akrylonitrylowy i żel krzemionkowy pokryty adhezyjnie keratyną mogą być z powodzeniem stosowane w technice chromatografii powinowactwa. Na szczególną uwagę zasługuje opracowana własna metoda wiązania ligandu przez otwarcie pierścieni w komponencie cukrowej. Dokonując optymalizacji oczyszczania en- do-PG wykazano, że jednostopniowe oczyszczenie enzymu przy użyciu zoptymalizowanej techniki chromatografii powinowactwa jest równie efektywne, jak trójstopniowe oczyszczanie stosowane tradycyjnie (ultrafiltracja, sączenie molekularne, chromatografia jonowymienna).

EN

Endopolygalacturonase (EC 3.2.1.15) from A.niger 71 was purified using optimalized conditions of liquid of column affinity chromatography. For these reasons it was used five supports, silanized porous glass, silica gel, silica gel adhesively covered with keratin or polyamide and copolymer acrylonitrile-divinylbenzene activated with diamines. The polygalacturonic acid was used in this chromatographic techniques as ligand. The polygalacturonic acid was bound to these five supports via free COOH groups or aldehyde groups obtaining after opening the galacturonic rings. It was described the optimalization of endopolygalacturonase purification on the column in 8 variants. The best results of 16 times purification of endo-PG was obtained using the column packed with copolymer acrylonitrile-divinylbenzene activated by ethylenediamine and polygalacturonic acid. This support was stable and many times reusable with good endo-PG elution efficiency.

Słowa kluczowe

PL

enzymy pektynolityczne; immobilizacja; chromatografia powinowactwa; ligandy; kwas poligalakturonowy

• Wydawca: -
• Czasopismo: Herba Polonica
• Rocznik: 1997
• Tom: 43
• Numer: 4
• Opis fizyczny: s.361-370, rys.,tab.,bibliogr.

Twórcy

autor

Ginalska G

• Uniwersytet M.Curie-Sklodowskiej, Pl.M.Curie-Sklodowskiej 3, 20-031 Lublin

autor

Lobarzewski J.

Bibliografia

• 1. FIEDUREK J.: Ann. Univ. M. Curie-Skłodowskiej, Sec. C 1981, 36, 37.
• 2. HEINRICHOVA K., REXOVA-BENKOVA L.: Biochem. Biophys. Acta 1976, 422, 349.
• 3. HEINRICHOVA K.: VEDA 1985, 40, 1199.
• 4. INOUE S., NAGAMATSU Y., HATANAKA C.: Agric. Biol. Chem. 1984, 48, 633.
• 5. ILCZUK Z.: Acta Microbiol. Pol., Ser. B 1973, 5, 95.
• 6. ILCZUK Z., WOŁEK K.: Przem. Ferm. Rol. 1973, 17, 11.
• 7. LAPPI D. A. i wsp.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976, 69, 878.
• 8. ŁOBARZEWSKI J. i wsp.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985, 131, 666.
• 9. ŁOBARZEWSKI J. i wsp.: Acta Biotechnol. 1988, 8, 47.
• 10. REXOVA-BENKOVA L., TIBENSKY V: Biochem. Biophys. Acta 1972, 268, 187.
• 11. SCHACTERLE G. R., POLLACK R. L.: Anal. Biochem. 1973, 51, 6554.
• 12. SOMOGYI M.: J. Biol. Chem. 1952, 193, 19.
• 13. WEBER M. i wsp.: J. Chromat. 1986, 355, 456.
• 14. WILCZEK J. W.: Meth. Enzymol. 1974, 34, 59.
• 15. ZABORSKY O. R., OGLETREE J.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 1974, 61, 210.