Application of multiplex PCR in routine microbiological diagnostics of Listeria monocytogenes and Listeria sp. strains in a meat-processing plant

• Autorzy: Medrala D. , Dabrowski W. , Szymanska L.
• Języki publikacji: EN

Abstrakty

EN

A multiplex PCR assay designed by Bansal [1996] was applied in a routine screening test of a meat-processing environment aimed at detection of Listeria monocytogenes and species of the genus Listeria. Listeria spp. strains yielded a single 938-bp product indicating presence of 16S rRNA conservative sequence typical of the genus, whereas L. monocytogenes strains yielded not only the 938-bp product but also a 750-bp product - a result of amplification within region of the listeriolysin (hly A) gene. The assay was used to verify identification of 50 colonies performed using classical tests, including catalase and hemolytic activity, motility and API®LISTERIA (bioMérieux) biochemical tests. Among isolates, 4 strains (8%) were found characterised by contradictory results of biochemical and genetic tests. The possibility of simultaneous identification and differentiation of potentially pathogenic L. monocytogenes strains from other Listeria spp. during one reaction performed was proved.

PL

Standardowe, klasyczne metody identyfikacji gatunkowej drobnoustrojów z rodzaju Listeria są mało skuteczne ze względu na wyjątkowe podobieństwo szczepów w obrębie rodzaju i grupy. Dodatkowo drobnoustroje należące do tego rodzaju występują powszechnie w przyrodzie, co skutecznie utrudnia szybką i niekłopotliwą izolację, a także wyodrębnienie i identyfikację szczepów Listeria monocytogenes mogących stanowić bezpośrednią przyczynę zachorowań na listeriozę u ludzi. Diagnostyka klasyczna nie tylko opóźnia śledzenie dróg transmisji patogenu w monitorowanym środowisku, ale również wydłuża czas podjęcia odpowiednich działań prewencyjnych zapobiegających jego rozprzestrzenianiu lub umożliwiających całkowitą jego eliminację. W pracy przedstawiono wyniki zastosowania techniki multiplex PCR w rutynowej ocenie zanieczyszczenia mikrobiologicznego środowiska przetwórstwa mięsnego. Multiplex PCR został opracowany przez Bansal [1996] w celu wyodrębnienia szczepów Listeria spp. spośród mikroflory towarzyszącej oraz dla jednoczesnej gatunkowej identyfikacji szczepów L. monocytogenes. Szczepy Listeria spp. charakteryzował produkt PCR wielkości 938 p.z., wskazujący na obecność konserwatywnej dla rodzaju sekwencji genu 16S rRNA. Dla szczepów L. monocytogenes charakterystyczny był dodatkowy produkt wielkości 750 p.z., świadczący o amplifikacji w obrębie sekwencji genu kodującego listeriolizynę (hly A) (rys. 1). Analizie poddano 50 szczepów (tab. 1) wyizolowanych w środowisku przetwórstwa mięsnego (m.in. tusze wieprzowe, urządzenia, narzędzia, powierzchnie robocze, wymazy z otoczenia) w celu potwierdzenia ich identyfikacji wykonanej metodami klasycznymi (aktywność katalazy, aktywność hemolityczna, zdolność do ruchu, aktywność biochemiczna API®LISTERIA (bioMérieux). Wśród izolatów zidentyfikowano 4 szczepy (8%), dla których rezultaty testów biochemicznych i analizy multiplex PCR wzajemnie się wykluczały. Trzy izolaty zostały uznane za L. monocytogenes dopiero na podstawie wyników PCR. Analiza multiplex umożliwiła jednoczesną identyfikację oraz odróżnianie potencjalnie chorobotwórczych dla ludzi szczepów L. monocytogenes od innych gatunków rodzaju Listeria podczas przebiegu jednej reakcji PCR, co jest szczególnie istotne dla postępowania epidemiologicznego zmierzającego do szybkiego wyizolowania czynnika etiologicznego infekcji.

Słowa kluczowe

EN

Listeria strain; Listeria monocytogenes; routine screening test; meat processing plant; hly gene; polymerase chain reaction; rRNA gene; diagnostics

• Wydawca: -
• Czasopismo: Polish Journal of Food and Nutrition Sciences
• Rocznik: 2003
• Tom: 12/53
• Numer: 1
• Opis fizyczny: p.59-64,fig.

Twórcy

autor

Medrala D.

• Agricultural University of Szczecin, Papieza Pawla VI 3, 71-459 Szczecin, Poland

autor

Dabrowski W.

autor

Szymanska L.