Klonowanie cDNA i ekspresja genu kodującego manganową dysmutazę ponadtlenkową Vicia faba ssp. minor w kalusie regenerującym i nieregenerującym

• Autorzy: Dabrowska G. , Kaczmarek K. , Skrzypek E. , Szechynska-Hebda M.

Warianty tytułu

EN

cDNA cloning and expression of gene encoding manganese superoxide dismutase of Vicia faba ssp. minor in regenerating and non-regenerating explants

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Dysmutazy ponadtlenkowe pełnią kluczową rolę w systemie antyoksydacyjnym, a ich obecność stwierdzono zarówno u bakterii tlenowych i drożdży, jak i u roślin wyższych i zwierząt. Badania dotyczące wpływu warunków stymulujących bądź hamujących dyferencjację kalusa na wzorzec ekspresji genu manganowej dysmutazy ponadtlenkowej przeprowadzono na bobiku odmiany Nadwiślański (Vicia faba ssp. minor). W oparciu o sekwencje dostępne w banku genów NCBI (National Center for Biotechnology Information), zaprojektowano startery i wykonano reakcję PCR w celu uzyskania fragmentu 318 pz, który wklonowano do wektora pCR®TOPII, zsekwencjonowano i użyto jako sondę do hybrydyzacji typu northern. Sondę wyznakowano radioizotopowo metodą transkrypcji in vitro, a po hybrydyzacji otrzymano sygnał dla transkryptu wielkości około tysiąca nukleotydów. Badania wykazały, że gen MnSod ulega wyższej ekspresji w kalusie regenerującym niż nieregeneruj ącym bobiku.

EN

Superoxide dismutases play a key role in the antioxidant system that explains their presence not only in aerobic bacteria and yeast, but also in higher plants and animals. The study concerning the effect of various conditions that stimulate or inhibit the differentiation of callus on manganese superoxide dismutase gene expression pattern was carried out on material derived from Vicia faba ssp. minor cv. Nadwiślański. On the basis of sequences contained in the GenBank National Center for Biotechnology, primers were designed and used in PCR reaction aiming at the amplification of 318 bp product, which was cloned into a vector pCR®TOPOII, sequenced and used as a probe in northern hybridization. The probe was radiolabelled by in vitro transcription, and after the hybridization, signals were obtained for about 1000 bp transcript. The study showed a higher expression of MnSod gene in regenerating and non-regenerating faba bean callus.

• Wydawca: -
• Czasopismo: Zeszyty Problemowe Postępów Nauk Rolniczych
• Rocznik: 2007
• Tom: 523
• Opis fizyczny: s.83-91,rys.,fot.,bibliogr.

Twórcy

autor

Dabrowska G.

autor

Kaczmarek K.

autor

Skrzypek E.

autor

Szechynska-Hebda M.

Bibliografia

• Alscher R. G., Erturk N., Heath L. S. 2002. Role of superoxide dismutases (SODs) in controlling oxidative stress in plants. J. Exp. Bot. 53: 1331 - 1341.
• Baek K-H., Skinner D. Z. 2005. Differential expression of manganese superoxide dismutase sequence variants in near isogenic lines of wheat during cold acclimation. Plant Cell Rep. 25: 223 - 230.
• Chomczyński P., Sacchi N. 1987. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem. 162: 156 - 159.
• Dat J. F., Inze D., Van Breusegem F. 2001. Catalase-deficient tabacco plants: tools for in planta studies on the role of hydrogen peroxide. Redox Rep. 6: 37 - 42.
• Dąbrowska G., Prusińska J., Goc A. 2005. Identyfikacja cDNA genu RSH (RelA/SpoT homolog) zaangażowanego w odpowiedź Pharbitis nil na warunki stresowe. Zesz. Probl. Post. Nauk Rol. 509: 333 - 341.
• Dubert F. 2003. Reakcje tkanek roślinnych in vitro na stres temperaturowy. X Ogólnopolska konferencja kultur in vitro i biotechnologii roślin. Biotechnologia roślinna w biologii, farmacji i rolnictwie. Wydawnictwa Uczelniane Akademii Techniczno- Rolniczej, Bydgoszcz, 18.
• Kucharska M. 1994. Markery biochemiczne i molekularne w badaniach kultur in vitro. Prace Ogrodu Botanicznego PAN, Warszawa - Powsin, 5/6: 9 - 18.
• Murashige T., Skoog F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15: 473 - 497.
• Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. 1989. Molecular cloning. A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 10.38 - 10.40.
• Scandalios J. G. 2005. Oxidative stress: molecular perception and transduction of signals triggering antioxidant gene defenses. Braz. J. Med. Biol. Res. 38: 995 - 1014.
• Skrzycki M., Czeczot H. 2004. Ekspresja genów dysmutazy ponadtlenkowej w stanie stresu oksydacyjnego. Post. Biol. Kom. 31: 81 -92.
• Skrzypek E. 2001. Optimization of the regeneration abilities offield bean (Vicia faba L. minor) in in vitro culture. Biol. Bull. Poznań 38(1): 87 - 95.
• Skrzypek E., Dubert F. 2002. Wzrost, różnicowanie i regeneracja bobiku (Vicia faba L. minor) w kulturach in vitro. Zesz. Probl. Post. Nauk Rol. 488: 555 - 564.
• Szyp I., Dąbrowska G., Tretyn A. 2001. Wykorzystanie tkanki kalusowej w badaniach nad molekularnymi podstawami fotoperiodycznej indukcji kwitnienia. Biotechnologia 2(53): 165 - 169.
• Wu G., Wilen R. W., Robertson A. J., Gusta L. V. 1999. Isolation, chromosomal localization, and differential expression of mitochondrial manganese superoxide dismutase and chloroplastic copper/zinc superoxide dismutase genes in wheat. Plant Physiol. 120: 513 - 520.