Wykrywanie bakterii Salmonella metodami molekularnymi w produktach żywnościowych

• Autorzy: Misiewicz A. , Goncerzewicz A.

Warianty tytułu

EN

Detection of Salmonella sp. in food using molecular methods

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Bakterie z rodzaju Salmonella są najbardziej znanymi bakteriami patogennymi występującymi w przemyśle spożywczym. Powodują zakażenia prawie wszystkich produktów żywnościowych – od mięsnych, mlecznych, jajecznych po rośliny oleiste i pasze. Wykrycie i identyfi kacja bakterii Salmonella na podstawie tradycyjnej metody mikrobiologicznej, zgodnie z normą PN-EN 6579:2003, jest ciągle powszechnie stosowane w laboratoriach. Analiza ta jest czaso- i pracochłonna, jej wykonanie trwa około 5–7 dni. Wykorzystanie nowoczesnych technik biologii molekularnej, z etapem namnożenia i izolacji DNA, do uzyskania końcowego wyniku trwa znacznie krócej. W niniejszej pracy zastosowano metodę Real-Time PCR i klasyczny PCR do identyfi kacji bakterii Salmonella w różnych produktach żywnościowych. Określono czas potrzebny do wykonania tej analizy molekularnej. Do reakcji Real-Time PCR wykorzystano komercyjny kit. Klasyczną reakcję PCR prowadzono z użyciem starterów Sal465Li Sal142F, uzyskując właściwy produkt o wielkości 343 pz. We wszystkich badanych próbkach wykryto bakterie Salmonella. Wynik analiz molekularnych uzyskano w ciągu 21–25 godzin.

EN

Pathogenic bacteria of Salmonella genus are the most common infections in food industry. They might to contaminate wide range of products, protein food e.g. meat, milk food, eggs and egg foods, plants and its preserves, fodder and feeds. Detection and identifi cation of Salmonella sp. are made using traditional methods corresponding with standard PN-EN 6579:2003. That method is commonly used in the microbiological laboratories its time consuming and laborious analysis. Using a modern molecular biology techniques allow to confi rm the Salmonella infections in 24-hours with enrichment and isolation steps. In our study were used Real-Time PCR and traditional PCR techniques to detect Salmonella pathogens from various foods. In addition we checked time of molecular analysis. In the study was used commercial kit to Real-Time PCR analysis and primer set Sal465L, Sal142F with are based on characteristic and solid genomic fragments of Salmonella genus. In every experiment we got positive results for food contaminated by Salmonella. The results were obtained in 21–25 hours.

Słowa kluczowe

PL

produkty spozywcze; bakterie; Salmonella; wykrywanie drobnoustrojow; metody molekularne; lancuchowa reakcja polimerazy

EN

food product; bacteria; Salmonella; microorganism detection; molecular method; polymerase chain reaction

• Wydawca: -
• Czasopismo: Zeszyty Problemowe Postępów Nauk Rolniczych
• Rocznik: 2013
• Tom: 573
• Opis fizyczny: s.3-11,rys.,fot.,bibliogr.

Twórcy

autor

Misiewicz A.

• Zakład Mikrobiologii, Instytut Biologii Przemysłu Rolno-Spożywczego, ul.Rakowiecka 36, 02-532 Warszawa

autor

Goncerzewicz A.

• Zakład Mikrobiologii, Instytut Biologii Przemysłu Rolno-Spożywczego, ul.Rakowiecka 36, 02-532 Warszawa

Bibliografia

• Arrach N., Porwollik S., Cheng P., Cho A., Long F., Choi A., McClelland M., 2008. Salmonella serovar identifi cation using PCR-based detection of gene presence and absence. J. Clin. Microbiol. 46 (8), 2581–2589.
• Atkins S.D., Clark I.M., 2004. Fungal molecular diadnostics: a mini revive. J. Appl. Genet. 45 (1): 3–15.
• Blais B.W., Martinez-Perez A., 2008. Detection of group D salmonellae including Salmonella Enteritidis in eggs by polymyxin-based enzyme-linked immunoabsorbent assay. J. Food Prot. 71, 392–396.
• Boughton C., Egan J., Kelly G., Markey B., Leonard N., 2007. Quantitative examination of Salmonella spp. in the lairage environment of a pig abattoir. Foodborne Pathog. Dis. 4, 26–32.
• Coyle E.F., Palmer S.R., Ribeiro C.D., Jones H.I., Howard A.J., Ward L., Rowe B., 1998. Salmonella enteritidis phage type 4 infection: association with hen’s eggs. Lancet. Dec. 3, 2 (8623), 1295–1297.
• D’Aoust J.Y., 1991. Psychrotrophy and foodborne Salmonella. Int. J. Food Microbiol. 13, 207–215.
• Daum L.T., Barnes W.J., McAvin J.C., Neidert M.S., Cooper L.A., Huff W.B., Daul L., Riggins W.S., Morris S., Salmen A., Lohman K.L., 2002. Real-Time PCR detection of Salmonella in suspect foods from a gastroenteritis outbreak in Kerr Country, Texas. J. Clin Microbiol. 40 (8), 3050–3052.
• Day J.B., Basavanna U., Sharma S.K., 2009. Development of a cell culture method to isolate and enrich Salmonella enterica serotype Enteritidis from shell eggs for subsequent detection by Real-Time PCR. Appl. Environ. Microbiol. 75 (16), 5321–5327.
• Fegan N., Vanderlinde P., Higgs G., Desmarchelier P., 2004. Quantifi cation and prevalence of Salmonella in beef cattle presenting at slaugher. J. Appl. Microbiol. 97, 892–898.
• Fricker M., Messelhausser U., Busch U., Scherer S., Ehling-Schulz M., 2007. Diagnostic real-time PCR assays for the detection of emetic Bacillus cereus strains in foods and recent food- -borne outbreaks. Appl. Environ. Microbiol. 73, 1892–1898.
• Malorny B., Hoorfar J., Bunge C., Helmuth R., 2003. Multicenter validation of the analytical accuracy of Salmonella PCR: towards and international standard. Appl. Environ. Microbiol. 69 (1), 290–296.
• Malorny B., Paccassoni E., Fach P., Bunge C., Martin A., Helmuth R., 2004. Diagnostic Real-Time PCR for detection of Salmonella in food. Appl. Environ. Microbiol. 70 (12), 7046–7052.
• Malorny B., Löfström C., Wagner M., Krämer N., Hoorfar J., 2008. Minireviews: Enumeration of Salmonella bacteria in food and feed samples by Real-Time PCR for quantitative microbial risk assessment. Appl. Environ. Microbiol. 74 (5), 1299–1304.
• Misiewicz A., Goncerzewicz A., Suchorzyńska M., 2009. Rapid molecular methods for the identification Salmonella sp. in food. poster. Konferencja Naukowa “BioMillenium”, Politechnika Gdańska, 22–24.10.2009.
• Naravaneni R., Jamil K., 2005. Rapid detection of food-borne pathogens by using molecular techniques. J. Med. Microbiol., 54, 51–54.
• Nissen M.D., Sloots T.P., 2002. Rapid diagnosis in pediatric infectious diseases: the past, the present and the future. Pediatr. Infect. Dis. J. 21, 605–612.
• Pindar K., Cook A., Pollari F., Ravel A., Lee S., Odumeru A.J., 2007. Quantitative effect of refrigerated storage time on the enumeration of Campylobacter, Listeria, and Salmonella on artifi cially inoculated raw chicken meat. J. Food Prot. 70, 739–743.
• PN-EN ISO 6579:2003/A1:2007 Mikrobiologia żywności i pasz. Horyzontalna metoda wykrywania Salmonella spp.
• Rozporządzenie (WE) nr 853/2004 Parlamentu Europejskiego i Rady z dnia 29 kwietnia 2004 r. Dz. Urz. UE L 139/55.
• Seo K.H., Valentin-Bon I.E., Bracket R.E., Holt P.S., 2004. Rapid specifi c detection of Salmonella enteritidis in pooled eggs by real-time PCR. J. Food Prot. 67, 864–869.
• Stephens N., Sault C., Firestone S.M., Lightfoot D., Bell C., 2007. Large outbreaks of Salmonella Typhimurium phage type 135 infections associated with the consumption of products cointaining raw egg in Tasmania. Commun. Dis. Intell. 31, 118–124.
• Swaminathan B., Feng P. 1994. Rapid detection of food-borne pathogenic bacteria. An. Rev. Microbiol. 48, 401–426.
• Wiedro K., Stachowska E., Chlubeko D., 2007. Łańcuchowa reakcja polimerazy z analizą w czasie rzeczywistym (RT-PCR). Roczniki Pomorskiej Akademii Medycznej w Szczecinie 53, 3, 5–9.
• Wyska E., Rosiak M., 2006. Zastosowanie łańcuchowej reakcji polimerazy w czasie rzeczywistym (real-time PCR) w badaniach farmakokinetycznych. Postępy Hig. Med. Dośw. 60, 660–666.