Validation of rapid method for simultaneous determination of vitamins A and E in milk using HPLC

• Autorzy: Gasior R. , Pieszka M.

Warianty tytułu

PL

Walidacja szybkiej metody jednoczesnego oznaczania witamin A oraz E w mleku technika HPLC

• Języki publikacji: EN

Abstrakty

EN

A method for the simultaneous determination of vitamin A (all-trans-retinol) and vitamin E (α-tocopherol) in milk using the HPLC technique with UV detection (324 nm, vitamin A) and fluorescent detection (Ex295 nm/Em350 nm, vitamin E) was validated. A reverse phase LiChroCART™ 250-4 Superspher™ 100 RP-18 column was used for chromatographic separation. A mixture of methanol and H2O (96.5:3.5 v/v) was used as the eluent (1 mL/min). The analyses were performed after spectrophotometric standardization of standard ethanol solutions, and the results were corrected by recovery. The residual coefficients of variation for the regression equation y=ax were 4.7% (vitamin A) and 8.3% (vitamin E), with r2 > 0.998 (for both vitamins). The limit of quantitation was 0.02 μg/mL and 0.3 μg/mL, repeatability and reproducibility 14% and 12.5%, and uncertainty of the method 20.7% and 18.8% for vitamins A and E, respectively. Vitamin recovery from milk was 51.6-75.1% (vitamin A) and 70.1-87.8% (vitamin E). The results of the reference material analyses (CRM 421, SRM 2383) concur with the certified reference values. The analytical method described is precise, accurate, fast and inexpensive.

PL

Zwalidowano metodę jednoczesnego oznaczania witaminy A (all-trans-retinol) i witaminy E (α-tokoferol) w mleku techniką HPLC z detekcją UV (324 nm, witamina A) i fluoroscencyjną (Ex295 nm/Em350 nm, witamina E). Do rozdziału chromatograficznego użyto kolumny LiChroCART™ 250-4 Superspher™ 100 RP-18. Jako eluent (1 mL/min) zastosowano mieszaninę metanolu z H2O (96,5:3,5 v/v). Alkoholowe roztwory próbek analizowano po uprzednim zmydleniu witamin (KOH, 60%, m/v, 70°C, 60 minut) w środowisku etanolu, wysoleniu, ekstrakcji (octan etylu i heksan, 1:9, v/v) górnej warstwy mieszaniny, odparowaniu pod azotem i rozpuszczeniu pozostałości w etanolu. Wyniki analiz korygowano o wcześniej wyznaczony odzysk (51,6-75,1%, witamina A i 70,1-87,8%, witamina E). Resztowe współczynniki zmienności równania regresji y=ax wynosiły 4,7% (witamina A) i 8,3% (witamina E), a r2 > 0,998 (dla obu witamin), granica oznaczenia ilościowego 0,02 μg/mL i 0,3 μg/mL, powtarzalność i odtwarzalność 14% i 12,5%, a niepewność metody 20,7% i 18,8%, odpowiednio dla witaminy A i E. Wiarygodność metody potwierdzono na materiałach referencyjnych (CRM 421 i SRM 2383). Opisana metoda analityczna, jest precyzyjna, dokładna, szybka i tania.

Słowa kluczowe

EN

high performance liquid chromatography; HPLC zob.high performance liquid chromatography; vitamin A; vitamin E; determination; milk; method validation; validation

• Wydawca: -
• Czasopismo: Polish Journal of Food and Nutrition Sciences
• Rocznik: 2007
• Tom: 57
• Numer: 4[A]
• Opis fizyczny: p.151-155,fig.,ref.

Twórcy

autor

Gasior R.

• National Research Institute of Animal Production, Central Laboratory, 32-084 Morawica, Poland

autor

Pieszka M.

Bibliografia

• 1. Ake M., Fabre H., Malan A.K., Mandrou B., Column liquid chromatography determination of vitamins A and E in powdered milk and local flour: a validation procedure. J. Chromatogr., 1998, 826, 183-189.
• 2. AOAC, Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists., 15th Edition, 1990, Washington DC, pp. 1071-1074.
• 3. Barbas C., Castro M., Bonet B., Viana M., Herrera E., Simultaneous determination of vitamins A and E in rat tissues by highperformance liquid chromatography. J. Chromatogr., 1997, 778, 415-420.
• 4. Dobecki M., Zapewnienie jakości analiz chemicznych. 1998, Instytut Medycyny Pracy im. prof. dra med. J. Nofera Press, Poland, Łódź, pp. 60, 95-96 (in Polish).
• 5. Eitenmiller R.R., Landen W.O., Vitamin analysis for the health and food sciences. 1999, CRC Press Inc., Boca Raton, USA, p. 116.
• 6. Ellison S.L.R., Rosslein M., Williams A. (Ed), Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement., 2000. Eurachem/Citac Guide.
• 7. Finglas P. M., Berg H. van den, Froidmont-Görtz I., The Certification of the mass fractions of vitamins in three reference materials: margarine (CRM 122), milk powder (CRM 421) and lyophilized Brussels sprouts powder (CRM 431) – vitamins A, D3 & E in CRM 122; C, D3, E & Niacin in CRM 421, and C & Niacin in CRM 431., 1997, Luxembourg, Off. for Off. Publ. of the Europ. Communities (Report EUR 18039 EN).
• 8. Gąsior R., Pieszka M., Evaluation of vitamins A and E level in meat by HPLC. Anim. Sci., 2006, 1, Suppl. October 2006, 88‑89.
• 9. Gąsior R., Ślusarczyk K., Szczypuła M., Validation of a method for determining amino acids in acid hydrolysates of feeds. Ann. Anim. Sci., 2005, 5, 1, 181-197.
• 10. Kunachowicz H., Nadolna I., Iwanow K., Przygoda B., Wartość odżywcza wybranych produktów spożywczych i typowych potraw. 2002, PZWL Warszawa (in Polish).
• 11. Pieszka M., Gąsior R., Barowicz T., Evaluation of HPLC method for the rapid and simple determination of α-tocopherol acetate in feed premixes. J. Anim. Feed Sci., 2002, 11, 527-536.
• 12. PN-EN ISO 14565:2002. Animal feeding stuffs-Determination of vitamin A content-Method using high-performance liquid chromatography (in Polish).
• 13. PN-EN ISO 6867:2002. Pasze. Animal feeding stuffs-Determination of vitamin E content-Method using high-performance liquid chromatography (in Polish).
• 14. Qian H., Sheng M., Simultaneous determination of fat-soluble vitamins A, D and E and pro-vitamin D2 in animal feeds by onestep extraction and high-performance liquid chromatography analysis. J. Chromatogr., 1998, 825, 127-133.
• 15. Standard Reference Material 2383, Certificate of Analysis, 2002, National Institute of Standards & Technology, Gaithersburg, MD 20899.
• 16. Sigma Product Information: [www.sigmaaldrich.com], retinol all trans, R-7632.