PL
Metodami rekombinacji genetycznej uzyskano preparat wydzielniczego białka YopD, który użyto jako antygenu w odczynie ELISA do serologicznej diagnostyki jersiniozy. Wyniki oznaczeń poziomu surowiczych przeciwciał dla tak uzyskanego antygenu pałeczek Yersinia porównano z wynikami oznaczeń uzyskanymi przy użyciu testu ELISA, w którym jako antygenu użyto białek wydzielniczych uzyskanych z supernatantu hodowli Y enterocolitica oraz przy użyciu komercyjnego testu ELISA z rekombinowanym antygenem białkowym. Na podstawie wyników oznaczeń wykazano pełną przydatność uzyskanego we własnym zakresie metodą rekombinacji genetycznej preparatu wy- dzielniczego białka YopD do diagnostyki jersiniozy.
EN
The aim of this study was to evaluate the usefulness of gene recombination technique using the pET-30 Ek/LIC expression vector for production a 36 kDa released protein called YopD and evaluate of this purified protein as antigen in serodiagnosis of yersiniosis. Protein YopD of Y enterocolitica was expressing in Escherichia coli BL21 (DE3) using the pET-30 Ek/LIC expression vector. Purification of the expressed enzyme from suspensions of E. coli cells treated with Bug BusterTM Protein/Extraction Reagent was accomplished by immobilised metal (№2+) affinity column chromatography (His-trap). The IgM, IgG and I gA class antibodies to YopD were measured in 100 serum samples collected from patients suspected for yersiniosis and 100 blood donors. The obtained results were compared to the results of ELISA with released proteins isolated from the culture of Y enterocolitica supernatant under calcium deficient conditions and commercial ELISA with recombinant released proteins. A very high (94.0-100.0%) specificity and good sensitivity (55,2 - 80.4%) were displayed by the ELISA with YopD in relation to other two ELISA. The results of our study showed that recombinant YopD protein purified by chromatography of bio-affinity may be used in serodiagnosis of yersiniosis as a high specific antigen free of Yersinia lipopolysaccharides.