EN
Our earlier studies carried out in silico demonstrated that different transcription factors have their putative binding sites in the 5’-flanking regions of rabbit milk protein genes. Now we extended his study to include the experimental analysis of the transcription factors. This study of electrophoretic mobility shift assay (EMSA) of nuclear proteins showed for the first time the presence of AP1, CREB, Myb, and Sp1 transcription factors in the rabbit mammary gland. The abundance of all transcription factors studied in the mammary gland changed during pregnancy-lactation-weaning cycle. The DNA-binding activity of the Myb transcription factor correlated well with the level of milk protein gene expression. The affinity of Myb to its binding sequence is methylation-dependent. One of CREspecific DNA-protein complexes was found only in nuclear protein from the lactating rabbits mammary gland. The amount of AP1 DNA-binding activity transiently decreased in the early involution. Transition from early to late involution was associated with the restoration of the AP1 activity, and with the decrease of the Myb and Sp1 protein-DNA binding activities.
PL
Nasze wcześniejsze badania prowadzone in silico wykazały obecność potencjalnych miejsc wiązania dla wielu czynników transkrypcyjnych w rejonie 5’-flankującym genów białek mleka. W niniejszej pracy analiza została poszerzona o doświadczalne zbadanie wiązania tych czynników z DNA. Stosując analizę EMSA do analizy białek jądrowych wydzielonych z gruczołu mlekowego w różnych stadiach rozwoju wykazaliśmy po raz pierwszy obecność u królic czynników transkrypcyjnych AP1, CREB, Myb i Sp1. Ilość białek wiążących się do sekwencji rozpoznawanej przez Myb koreluje z aktywnością transkrypcji genów białek mleka; powinowactwo wiązania Myb zależy od metylacji sekwencji DNA. Ilość czynników transkrypcyjnych w gruczole mlekowym zmienia w cyklu ciąża - laktacja - zasuszanie. Jeden z kompleksów DNA-białko, wiążących się do sekwencji CRE jest obecny w gruczole mlekowym tylko w okresie laktacji. Podczas inwolucji gruczołu mlekowego obserwowano przejściowe zmniejszenie ilości białek wiążących się do sekwencji rozpoznawanej przez czynnik transkrypcyjny AP1. W późniejszym okresie inwolucji ilość tego kompleksu powraca do poprzedniego poziomu, zmniejsza się natomiast poziom kompleksów DNA-białko tworzonych przez Myb i Sp1.