EN
Background. As the currently known diagnostic DNA targets amplified in the PCR assays for detection of poisonous mushrooms have their counterparts in edible species, there is a need to design PCR primers specific to the genes encoding amanitins and phallotoxins, which occur only in poisonous mushrooms. Objective. The aim of the study was testing of PCR-based method for detection of all genes encoding hepatotoxic cyclic peptides - amanitins and phallotoxins present in the most dangerous poisonous mushrooms. Material and Methods. Degenerate primers in the PCR were designed on the basis of amanitins (n=13) and phallotoxins (n=5) genes in 18 species of poisonous mushrooms deposited to Genbank of the National Center for Biotechnology Information. Results. The specificity of the PCR assays was confirmed against 9 species of edible mushrooms, death cap - Amanita phalloides and panther cap - Amanita pantherina. Conclusions. Designed two couples of PCR-primers specific to amanitins and phallotoxins genes can be recommended for detection of Amanita phalloides and other mushroom species producing hepatotoxic cyclic peptides - amanitins and phallotoxins.
PL
Wprowadzenie. Ponieważ, obecnie znane diagnostyczne cele molekularne w genomach trujących grzybów kapeluszowych amplifikowane metodą PCR mają swoje odpowiedniki u grzybów jadalnych, istnieje potrzeba zastosowania specyficznych sekwencji starterowych wobec amanityn i fallotoksyn, występujących jedynie u grzybów trujących. Cel. Celem prowadzonych badań było sprawdzenie przydatności sekwencji starterowych do reakcji PCR specyficznych wobec wszystkich aktualnie poznanych genów kodujących hepatotoksyczne cykliczne peptydy - amanityny oraz fallotoksyny trujących grzybów kapeluszowych. Materiał i Metody. Sekwencje oligonokleotydowe starterów do reakcji PCR zaprojektowane zostały w oparciu o zdeponowane w Genbanku geny amanityn (n=13) oraz fallotoksyn (n=5). Wyniki. Specyficzność opracowanych testów PCR potwierdzono wobec 9 gatunków grzybów jadalnych oraz muchomora sromotnikowego - Amanita phalloides, jak i muchomora plamistego - Amanita pantherina. Wnioski. Zastosowane sekwencje starterowe do wykrywania genów kodujących amanityny i fallotoksyny metodą PCR, mogą być wykorzystane do wykrywania muchomora sromotnikowego oraz innych gatunków zdolnych do syntezy amanityn oraz fallotoksyn.