Wzrost z sacharozy klonów drożdży Yarrowia lipolytica z genem inwertazy z Saccharomyces cerevisiae

• Autorzy: Walczak E. , Robak M.

Warianty tytułu

EN

Growth on sucrose of Yarrowia lipolytica yeasts clones with invertase gene from Saccharomyces cerevisiae

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Celem badań była ocena wzrostu potencjalnych producentów heterologicznych białek: klonów Suc+ drożdży Yarrowia lipolytica A-101. Wzrost z sacharozy oce­niano dla 26 transformantów, dla szczepu wyjściowego (dzikiego) A-101 i referencyjnego rekombinowanego szczepu W29 ura3-302. Badane transformanty różniły się zdolnością do wzrostu z sacharozy (długość trwania lag fazy, moment osiągnięcia fazy stacjonarnej wzrostu). Natomiast bez względu na typ przeprowadzonej modyfikacji nie odnotowano różnic we wzroście z fruktozy i glukozy. Oceniano także wpływ początkowego pH hodowli (6,8) oraz dodatku peptonu (0,1 i 0,01%) na indukcję promotoraXPR2. Wykazano, że KLON1 oraz KL0N10 wyrastają obficie z sacharozy już przy minimalnej dawce peptonu (0,01%). Z kolei stabilizacja pH w początkowym okresie wzrostu na poziomie 6,8 wpłynęła pozytywnie na przebieg hodowli. Nawet w podłożu zawierającym 30% sacharozy, pomimo dłuższej lag fazy, klony wyrastały lepiej z buforem niż bez.

EN

The aim of the study was to evaluate the growth of potential heterologous proteins producers: Suc+ clones of Yarrowia lipolytica A-101. Growth of 26 transformants, parental strain (wild) and reference strain W29ura3-302 was studied. Transformants showed differences in the ability of growth on sucrose (biomass, lag time duration, beginning of stationary phase). Beside the type of transformation, no differences in yeasts growth were observed on glucose and fructose. Influence of pH (6,8) and peptone addition (0,01 and 1%) on XPR2 promoter induction was analyzed. Both inducers were effective, allowing yeasts growth on sucrose. Growth of two transformants: KLON1 and KLONIO on sucrose was abundant, even with minimal peptone dose (0,01%). Stabilization of pH at 6,8 in the first hours of yeasts growth had a positive effect on culture. Clones grew better with buffer in the medium with 30 % sucrose, a substrate concentration which has induced longer lag phase.

Słowa kluczowe

PL

drozdze; Yarrowia lipolytica; Saccharomyces cerevisiae; sacharoza; bialko; produkcja bialka; ekspresja genow; inwertaza; klony

EN

yeast; Yarrowia lipolytica; Saccharomyces cerevisiae; saccharose; protein; protein production; gene expression; invertase; clone

• Wydawca: -
• Czasopismo: Acta Scientiarum Polonorum. Biotechnologia
• Rocznik: 2009
• Tom: 08
• Numer: 4
• Opis fizyczny: s.25-36,rys.,tab.,wykr.,bibliogr.

Twórcy

autor

Walczak E.

• Uniwersytet Przyrodniczy we Wrocławiu, ul.C.K.Norwida 25, 50-375 Wrocław

autor

Robak M.

Bibliografia

• Blanchin-Roland S., Cordero Otero R.R., Gaillardin C., 1994. Two upstream activating sequence control the expression of the XPR2 Gene in the yeast Yarrowia lipolytica. Mol. Cell Biol., 14 (1): 327-338.
• Förster A., Aurich A., Mauersberger S., Barth G., 2007a. Citric acid production from sucrose using a recombinant strain of the Yarrowia lipolytica. Appl. Microbiol. Biotechnol., 75 (6): 1409-1417.
• Gellissen G., Kunze G., Gaillardin C., Cregg J.M., Berardi E., Veenhuis M., van der Klei I., 2005. New yeast expression platforms based on methylotrophic Hansenula polymorpha and Pichia pastoris and on dimorphic Arxula adeninivorans and Yarrowia lipolytica - A comparison. FEMS Yeast Res., 5: 1079-1096.
• Hamsa P.V., Chattoo B.B., 1994. Cloning and growth-regulated expression of the gene encoding the hepatitis B virus middle surface antigen in Yarrowia lipolytica. Gene, 143: 165-170.
• Juretzek T., Le Dall M.T., Mauersberger S., Gaillardin C., Barth G., Nicaud J.M., 2001. Vectors for gene expression and amplification in the yeast Yarrowia lipolytica. Yeast, 30, 18(2): 97-113.
• Madzak C., Nicaud J.M., Gaillardin C., 2005. Yarrowia lipolytica, [in:] Gellissen G., (Ed)., Production of recombinant proteins. Novel Microbial and Eukaryotic Expression System. WILEY-VCH VerlagGmbH & Co. KgaA.
• Madzak C., Treton B., Blanchin-Roland S., 2000. Strong hybrid promoters and integrative expression/secretion vectors for quasi-constitutive expression of heterologous proteins in the yeast Yarrowia lipolytica. J. Mol. Microbiol. Biotechnol., 2(2): 207-216.
• Nicaud J.M., Fabre E., Gaillardin C., 1989. Expression of invertase activity in Yarrowia lipolytica and its use as a selective marker. Curr. Genet., 16 (4): 253-260.
• Nicaud J.M., Madzak C., van der Broek P., Gysler C., Duboc P., Niederberger P., Gaillardin C., 2002. Protein expression and secretion in the yeast Yarrowia lipolytica. FEMS Yeast Res., 2: 371-379.
• Park C.S., Chang C.C., Kim J.Y., Ogrydziak D.M., Ryu D.Y., 1997. Expression, secretion, and processing of rice a-Amylase in the yeast Yarrowia lipolytica. J. Biol. Chem., 272: 6876­6881.
• Robak M., 2007. Yarrowia lipolytica specific growth rate on acetate medium supplemented with glucose, glycerol, ethanol. Acta Sci. Pol., Biotechnol., 6(1): 23-31.
• Robak M., Walczak E., 2009. Niekonwencjonalne drożdże w produkcji heterologicznych białek, Biotechnologia, 49(87): 46-65.
• Rywińska A., 2008. Wykorzystanie glicerolu odpadowego do biosyntezy kwasu cytrynowego przez Yarrowia lipolytica Wratislavia AWG7. Acta Sci. Pol., Biotechnol. 7(4): 13-22.
• Walczak E., Robak M., Mauersberger S., 2007a. Transformacja szczepu niekonwencjonalnych drożdży Yarrowia lipolytica. III Krajowy Kongres Biotechnologii, 09-12 września 2007a, Poznań.
• Walczak E., Robak M., Mauersberger S., 2007b. Gene disruption, transformants selection and physiologic properties of Yarrowia lipolytica A101 clones. 8th International Symposium on Biocatalysis and Biotransformations -BIOTRANS 2007. 08-13.07.2007b, Oviedo, Hiszpania.
• Watson J.D., Baker T.A., Bell S.P., Gann A., Levine M., Losick R., 2008. Molecular biology of the gene (6th Edition). Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
• Wojtatowicz M., Rymowicz W., Robak M., Żarowska B., Nicaud J.M., 1997. Kinetics of cell growth amd citric acid production by Yarrowia lipolytica Suc+ transformants in sucrose me­dia. Pol. J. Food Nutr. Sci., 6/47: 4, 49-54.