Izolacja i wstepna charakterystyka niskoproteazowych mutantow Trichoderma reesei

• Autorzy: Janas P , Fiedurek J , Targonski Z , Mleko S
• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Po mutagenizacji promieniowaniem UV i NTG szczepu Trichoderma reesei M-7 i selekcji na podłożu z dodatkiem żelatyny wyizolowano około 960 niskoproteazowych mutantów. Dziesięć z nich zostało przetestowanych podczas hodowli okresowych w zakresie produkcji celulaz, proteaz i beta-galaktozydazy w obecności serwatki i laktozy jako źródła węgla. Aktywności proteolityczne oznaczone po hodowlach 9 mutantów w obecności laktozy były niższe od szczepu wyjściowego. Zaobserwowano większy indukcyjny wpływ serwatki niż laktozy, na sekrecję proteaz przez wszystkie badane szczepy. Czysta laktoza okazała się bardziej efektywnym induktorem produkcji beta-galaktozydazy niż zawarta w serwatce. Plony biomasy większości mutantów po hodowlach na serwatce były tylko nieznacznie wyższe od oznaczonych po hodowlach na czystej laktozie. Było to prawdopodobnie związane z litycznym mechanizmem kompensującym proteaz, przejawiających wyższe aktywności w filtratach pochodzących z hodowli w obecności serwatki. Praca jest wstępem do dalszych badań nad zależnościami pomiędzy proteazami i innymi enzymami w filtratach pohodowlanych Trichoderma reesei.

EN

It has been isolated 960 low-protease mutants after mutagenisation using UV radiation and NTG and selection on medium with addition of gellatine. Ten of them have been tested during batch cultivation for the production of cellulases, proteases and beta-galactosidase in the presence of whey and lactose as a source of carbon. Proteolytic activities estimated after cultivation of 9 mutants in the presence of lactose were lower then parental strain. It has been observed better inductive effect of whey then lactose on the secretion of proteases by all mutants tested. Pure lactose appeared to be more effective inducer of the production of beta-galactosidase then contains in whey. Biomass concentration of most mutants after cultivation on whey was only slightly higher then estimated after cultivation on pure lactose. It was probably connected with lytic compensatory mechanism of proteases exhibited higher activities in culture filtrates from cultivation in the presence of whey. This work is an introduction for future studies on correlation between proteases and other enzymes in culture filtrates of Trichoderma reesei.

Słowa kluczowe

PL

mutanty; aktywnosc proteolityczna; grzyby; aktywnosc enzymatyczna; Trichoderma reesei; enzymy celulolityczne; biomasa; serwatka; laktoza

EN

mutant; proteolytic activity; fungi; enzyme activity; Trichoderma reesei; cellulolytic enzyme; biomass; whey; lactose

• Wydawca: -
• Czasopismo: Żywność Nauka Technologia Jakość
• Rocznik: 2003
• Tom: 10
• Numer: 2
• Opis fizyczny: s.17-26,tab.,rys.,bibliogr.

Twórcy

autor

Janas P

• Akademia Rolnicza,ul. Skromna 8, 20-704 Lublin Katedra Technologii Przemyślu Rolno- Spożywczego i Przechowalnictwa

autor

Fiedurek J

• Zakład Mikrobiologii Przemysłowej, Uniwersytet Marii Curie-Sklodowskiej, ul. Akademicka 15, 20-031 Lublin

autor

Targonski Z

• Akademia Rolnicza,ul. Skromna 8, 20-704 Lublin Katedra Technologii Przemyślu Rolno- Spożywczego i Przechowalnictwa

autor

Mleko S

• Akademia Rolnicza,ul. Skromna 8, 20-704 Lublin Katedra Technologii Przemyślu Rolno- Spożywczego i Przechowalnictwa

Bibliografia

• [1] Akiba S., Kimura Y., Yamamoto K., Kumagai H.: Purification and characterization of a protease- resistant cellulase from Aspergillus niger. J. Ferment. Bioeng., 1994, 79 (2), 125-150.
• [2] Ghose T.K.: Measurement of cellulase activities. Pure Appl. Chem., 1987,55, 257.
• [3] Haab D., Hagspiel K., Szakmary K., Kubicek C.P.: Formation of the extracellular proteases from Trichoderma reesei QM 9414 involved in cellulase degradation. J. Biotechnol., 1990,16, 187-198. [4] Hagspiel K., Haab D., Kubicek C.P.: Protease activity and proteolytic modification of cellulases from Trichoderma reesei QM 9414 selectant. Appl. Microbiol. Biotechnol., 1989,32, 61-67.
• [5] Janas P.: Produkcja celulaz, ksylanaz i enzymów autolitycznych przez wybrane mutanty Trichoderma reesei w hodowlach okresowych i ciągłych. Praca doktorska, UMCS, Lublin 1997, s.92.
• [6] Janas P., Targoński Z., Udeh K.O., Waśko A.: Production of extracellular enzymes by Tichoderma reesei M-7 on mixtures of lactose and glucose at different temperatures. Pol. J. Food. Nutr. Sci., 2002,11 (52), 23-29.
• [7] Jiang X., Oohira K., Iwasaki Y., Nakano H., Ichihara S., T Yamane.: Reduction of protein degradation by use of protease-deficient mutants in cell-free protein synthesis system of Escherichia coli. J. Biosc. Bioeng., 2002,93 (2), 151-156.
• [8] Kammel W.P., Kubicek C.P.: Absence of postsecretional modification in extracellular proteins of Trichoderma reesei during growth on cellulose. J. Appl. Biochem., 1985, 7,138-144.
• [9] Mandels W., Weber J.: The production of cellulase. In: Cellulase and their application. Adv. Chem. Ser. Eds.: G.J. Hajny, E.T. Reese, Pergamon Press, Oxford 1969, pp. 391-413
• [10] Sheir-Neiss G., Montenecourt B.S.: Characterization of the secreted cellulases of Trichoderma reesei wild type and mutants during controlled fermentations. Appl. Microbiol. Biotechnol., 1984, 20, 46- 53