PL EN


Preferencje help
Widoczny [Schowaj] Abstrakt
Liczba wyników
1999 | 39 | 1 |
Tytuł artykułu

Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. VIII. The ligations of the inserts with the pET-3a vector and the identification of the bacterial colonies, containing the recombinant plasmids

Autorzy
Treść / Zawartość
Warianty tytułu
Języki publikacji
EN
Abstrakty
EN
The technology used for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments in regard to the ligations of the inserts with the pET-3a vector and the identification of the bacterial colonies, containing the recombinant plasmids, is presented. The main steps include: calculation of the molar ratios of the vector to insert DNA, the ligation reactions, transformation of the competent E. coli cells of the XL-1 strain, isolation of the plasmids, digestion of the plasmid preparations with the Nde I and Bam HI to indicate the presence of the inserts cloned into the plasmids, using the agarose gel electrophoresis (2% gel, 1 x TBE buffer) of the plasmids samples, with the released inserts, after the digestion, transformation of the competent BL21 (DE3) cells of E. coli with the isolated recombinant plasmids, identification of the bacterial cells, carrying the pET-3a plasmids with the cloned inserts and the storage of these cells.
PL
Przedstawiono technologię użytą do klonowania fragmentów DNA odzwierciedlających otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C Chironomus tentans w zakresie ligacji wstawek z wektorem pET-3a oraz identyfikacji kolonii bakteryjnych, zawierających rekombinacyjne plazmidy. Główne etapy obejmują: obliczenie stosunków molarnych wektora do DNA wstawki, reakcje ligacji, transformację komórek kompetentnych E. coli szczepu XL-1, izolację plazmidów, trawienie preparatów plazmidów Nde I i Bam Hl w celu wskazania obecności wklonowanych do plazmidów wstawek, uwolnionych z tych plazmidów poprzez trawienie wymienionymi enzymami restrykcyjnymi. Analizę produktów trawienia poszczególnych próbek plazmidów wykonano przy użyciu elektroforezy w żelu agarozowym (2% żel, 1 x stężony bufor TBE). Następne etapy to transformacja komórek kompetentnych E. coli BL21(DE3) preparatami wyizolowanych zrekombinowanych plazmidów pET-3a i identyfikacja komórek bakteryjnych, zawierających plazmidy pET-3a z wklonowanymi wstawkami oraz przechowywanie tych komórek.
Wydawca
-
Rocznik
Tom
39
Numer
1
Opis fizyczny
p.74-79
Twórcy
autor
  • Institute of Plant Protection, Miczurina 20, 60-318 Poznan, Poland
Bibliografia
  • 1. Borowicz B.P. 1995. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame I of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. I. The technology for the preparation of the samples (in English). Prace Nauk. Inst. Ochr. Roślin 36 (1/2): 69-76.
  • 2. Borowicz B.P. 1995. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame I of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. II. The technology required to obtain the DNA fragment (in English). Prace Nauk. Inst. Ochr. Roślin 36 (1/2): 77-82.
  • 3. Borowicz B.P. 1995. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame I of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. III. The effect of the applied technologies (in English). Prace Nauk. Inst. Ochr. Roślin 36 (1/2): 83-93.
  • 4. Borowicz B.P. 1996. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame II of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. I. The technology for the preparation of the primers. J. Plant Protection Res., 37 (1/2): 138-144.
  • 5. Borowicz B.P. 1996. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame II of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. II. The technology for the preparation of the template. J. Plant Protection Res., 37 (1/2): 145-148.
  • 6. Borowicz B.P. 1996. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame II of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. III. The DNA amplification technology. J. Plant Protection Res., 37 (1/2): 149-155.
  • 7. Borowicz B.P. 1996. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame II of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. IV. The product of the applied technologies. J. Plant Protection Res., 37 (1/2): 156-164.
  • 8. Borowicz B.P. 1996. Isolation of the DNA fragment reflecting the Open Reading Frame II of the I-18 C gene of Chironomus tentans by the Polymerase Chain Reaction. V. Different mechanisms of regulation regarding the Open Reading Frames. J. Plant Protection Res., 37 (1/2): 165-171.
  • 9. Del Sal G.M., Manfioletti G., Schneider C. 1988. A one-tube plasmid DNA mini-preparation suitable for sequencing. Nucl. Acids Res., 16: 9878 pp.
  • 10. Lezzi M., Lutz B., Dorsch-Haesler K. 1989 b. The ecdysterone-controlled chromosome region I-18 C in C. tentans: from cytology to molecular biology. Acta Biol. Debr. Oecol. Hung., 2: 129-139.
  • 11. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. 1989. Molecular Cloning. A laboratory manual. Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, Books: 1-3.
  • 12. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. 1989. Plasmid Vectors (chapter 1) in Molecular Cloning. A laboratory manual. Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, Book 1: 1.2-1.110.
  • 13. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. 1989. Expression of Cloned Genes in Escherichia coli (chapter 17) in Molecular Cloning. A laboratory manual. Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, Book 3: 17.2-17.44.
  • 14. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. 1989. Commonly Used Techniques in Molecular Cloning (Appendix E) in Molecular Cloning. A laboratory manual. Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, Book 3: E.5-E.7.
  • 15. Studier F.W., Rosenberg A.H., Dunn J.J., Dubendorff J.W. 1990. Use of T7 RNA Polymerase to direct expression of cloned genes. Methods in Enzymology, Goeddel D.V. (ed.), 1985: 60-89.
  • 16. Winnacker E.-L. 1987. From Genes to Clones. Introduction to Gene Technology (in English). VCH Verlags-gesellschaft mbH, D-6940 Weinheim, Germany: 1-634 pp.
Typ dokumentu
Bibliografia
Identyfikatory
Identyfikator YADDA
bwmeta1.element.agro-article-8e374148-bc78-4f00-87ee-f7fbfb874a43
JavaScript jest wyłączony w Twojej przeglądarce internetowej. Włącz go, a następnie odśwież stronę, aby móc w pełni z niej korzystać.