Wykorzystanie metod hybrydyzacji in situ i PCR in situ do wykrywania utajonego zakazenia wywolanego dzikim szczepem HSV-1 oraz mutantem o oslabionej reaktywacji

• Autorzy: Kosz-Vnenchak M. , Dryla A. , Szuster A.
• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Przy użyciu metod hybrydyzacji in situ i PCR in situ badano liczbę komórek zakażonych latentnie dzikim szczepem wirusa HSV-1 oraz jego mutantem o osłabionej reaktywacji. Dla obu szczepów liczba komórek, w których wykrywano genom wirusa była bardzo zbliżona. Natomiast liczba komórek Z dużą ilością DNA w przypadku mutanta była znacznie mniejsza w porównaniu z dzikim szczepem wirusa.

EN

The aim of the study was to detect the number of latently infected cells with wild type virus and with mutant with reduced reactivation. Using PCR in situ method we established, that the number of cells containing genome of these viruses do not differ especially between them. The number of cells with LAT expression is significantly reduced in the ganglia infected with mutant with impaired reactivation as we showed using in situ hybridization. Based on the observations of other autors, that high expression of LATs takes place in cells with high copy number of viral DNA our results showed, that after infection of mice with mutant with reduced reactivation less cells contain high copy number of viral DNA than after infection with wild type KOS. We suggest that impaired reactivation of an ICP22 mutant occurs as a result of reduced number of cells with copy number of viral DNA.

Słowa kluczowe

PL

mutanty; latencja; infekcja wirusowa; komorki; lancuchowa reakcja polimerazy; hybrydyzacja; wirus HSV-1; herpes simplex 1

• Wydawca: -
• Czasopismo: Medycyna Doświadczalna i Mikrobiologia
• Rocznik: 2002
• Tom: 54
• Numer: 2
• Opis fizyczny: s.145-150,tab.,bibliogr.

Twórcy

autor

Kosz-Vnenchak M.

• Uniwersytet Jagiellonski, 30-387 Krakow, ul.Gronostajowa 7

autor

Dryla A.

autor

Szuster A.

Bibliografia

• 1. Bruni R, Roizman B. Herpes simplex virus 1 regulatory protein ICP22 interacts with a new cell cycle-regulated factor and accumulates in a cell cycle-dependent fashion in infected cells. J Virol 1998; 72: 8525-31.
• 2. Hasse A, Brahic M, Stowring L, Blum H. Detection of viral nucleic acids by in situ hybridization. Methods Virol 1984; 7: 189-26.
• 3. Jugowic P, Hill AM, Tomazin R i inni. Inhibition of major histocompatibiliti complex class I antigen presentation in pig and primate cells by herpes simplex virus type 1 and 2 ICP47. J Virol 1998; 72: 5076-84.
• 4. Kosz-Vnenchak M. Hybrydyzacja in situ. W: Praktikum z wybranych zagadnień inżynierii genetycznej. Red.r Z. Porwit-Bóbr, skrypty uczelniane nr 666, Drukarnia UJ, 1992; 111-16.
• 5. Kosz- Vnenchak M, Jacobson J, Coen DM, Knipe DM. Evidence for a novel regulatory pathway for Herpes Simplex Virus gene expression in trigeminal ganglion neurons. J Virol 1993; 67: 5383-93.
• 6. Kosz-Vnenchak M, Krzeszowiak A, Zawilińska B. Porównanie czułości metod radioaktywnej i nieradioaktywnej hybrydyzacji in situ w celu wykrywania obecności transkryptów LAT wirusa opryszczki (HSV). Mikrobiologia Medycyna 1997; 4: 26-31.
• 7. Kosz-Vnenchak M, Dryla A, Grabiec A. Metoda PCR in situ i przykłady jej zastosowania w badaniach infekcji wirusowych. Mikrobiologia Medycyna 1998; 1: 16-21.
• 8. Krzeszowiak A, Kosz-Vnenchak M. Hybrydyzacja in situ i jej wykorzystanie w infekcji wirusowych. Mikrobiologia Medycyna 1996; 2: 6-13.
• 9. Leib DA, Bogard CL,Kosz- Vnenchak M i inni. A deletion Mutant of the latency-associated transcript of herpes simplex virus type 1 reactivates from latent state with reduced frequency. J Virol 1989; 63: 2893-2900.
• 10. Margolis TP, Sederati F, Dobson AT i inni. Pathways of viral gene expression during acute neuronal infection with HSV-1. Virology 1992; 189: 150-60.
• 11. Lewis F. An approach to in situ PCR. PE Applied Biosystems, A division of The Perkin Elmer Corporation 1996.
• 12. Proďhon C, Machuca I, Berthomme H i inni. Characterization of regulatory functions of the HSV-1 immediate-early protein ICP22. Virology 1996; 226: 393-402.
• 13. Ramakrishnan R, Levine M, Fink DJ. PCR-based analysis of herpes simplex type 1 latency in the rat trigeminal ganglion established with a ribonucleotide reductase-deficient mutant. J Virol 1994; 68: 7083-91.
• 14. Ramakrishnan R, Poliani PL, Levine M, Fink DJ. Detection of herpes simplex virus type 1 latency-associated transcript expression in trigeminal ganglia by in situ reverse transcriptase PCR. J Virol 1996; 70: 6519-23.
• 15. Rice SA, Long MC, Lam V i inni. Herpes simplex virus immediate-early protein ICP22 is required for viral modification of host RNA polymerase II and establishment of the normal viral transcription program. J Virol 1995; 69: 5550-59.
• 16. Roizman BK, Knipe DM. Herpes simplex viruses and their replication.W Knipe DM, Howley PM (red), Fields Virology. Lippincott Williams and Wilkins Publisher, Philadelphia, 2001; 2399-60.
• 17. Sawtell NM, Poon DK, Tansky CS, Thompson RL. The latent herpes simplex virus type 1 genome copy number in individual neurons is virus strain specific and correlates with reactivation. J Virol 1998; 72: 5343-50.
• 18. Sears AE, Halliburton IW, Meignier B i inni. Herpes simplex virus mutant deleted in the 22 gene: growth and gene expression in permissive and restrictive cells, and establishment of latency in mice. J Virol 1985; 55: 338-46.
• 19. Stevens JC, Wagner EK, Devi-Rao G i inni. RNA complementary to herpesvirus-gene mRNA is predominant in latently infected neurons. Science 1987; 235: 1056-59.
• 20. Stroop WG, Rock DL, Fraser NW. Localization of herpes simplex virus in trigeminal and olfactory systems of the central nervous system during acute and latent infection by in situ hybridization. Lab Invest 1984; 51: 27-38.