Zastosowanie reakcji z lizatem amebocytow Limulus [LAL] do oznaczania biologicznej aktywnosci lipopolisacharydow referencyjnych i klinicznych szczepow z grupy Bacteroides fragilis

• Autorzy: Rokosz A. , Fiejka M. , Gorska P. , Aleksandrowicz J. , Meisel-Mikolajczyk F. , Luczak M.
• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Przedmiot badań stanowiły lipopolisacharydy wyekstrahowane z ośmiu referencyjnych i dwóch klinicznych szczepów grupy B. fragilis (BFG). Biolo#giczną aktywność preparatów LPS oznaczono przy użyciu fotometrycznego testu BET (poprzednio LAL). Aktywność lipopolisacharydów pochodzących z pałeczek rodzaju Bacteroides porównano z aktywnością LPS E. coli O55:B5. Największy aktywnością w reakcji z odczynnikiem LAL odznaczały się lipopolisacharydy tych gatunków pałeczek BFG, które są ważne z klinicznego punktu widzenia - B. fragilis i B. thetaiotaomicron.

EN

The aim of this study was to determine and compare a biological activity of lipopolysaccharides (LPS) from reference and clinical strains of strictly anaerobic bacteria belonging to the Bacteroides fragilis group (BFG) by means of quantitative, photometric BET (LAL) method with Limulus polyphemus amoebocyte lysate and chromogenic substrate S-2423. Lipopolysaccharides of five BFG species were extracted by Westphal and Jann method (1965) from eight reference and two clinical strains of B. fragilis group. Crude LPS preparations were purified according to the procedure described by Gmeiner (1975) with ultracentrifugation and nuclease treatment. Biological activities of bacterial endotoxins were determined by quantitative BET method with chromogenie substrate S-2423 (ENDOCHROME™ kit, Charles River Endosafe® Ltd., USA). Tests were performed aoccording to the producer's recommendations. E. coli O55:B5 LPS was applied to compare its activity in reaction with LAL reagent with activities of LPS preparations from rods of the Bacteroides genus. Among examined bacterial compounds the most active in BET method was E. coli O55:B5 LPS. Activities of lipopolysaccharides from five species of BFG rods in reaction with Limulus amoebocyte lysate were differentiated. Greater ability to activate LAL proenzyme revealed lipopolysaccharides of these species of the Bacteroides genus, which are important from the clinical point of view - B. fragilis and B. thetaiotaomicron.

Słowa kluczowe

PL

endotoksyny; przewod pokarmowy; lipopolisacharydy; szczepy bakteryjne; Bacteroides thetaiotaomicron; mikrobiologia lekarska; Bacteroides fragilis; test BET; aktywnosc biologiczna

• Wydawca: -
• Czasopismo: Medycyna Doświadczalna i Mikrobiologia
• Rocznik: 2002
• Tom: 54
• Numer: 4
• Opis fizyczny: s.365-369,tab.,bibliogr.

Twórcy

autor

Rokosz A.

• Akademia Medyczna, Warszawa

autor

Fiejka M.

autor

Gorska P.

autor

Aleksandrowicz J.

autor

Meisel-Mikolajczyk F.

autor

Luczak M.

Bibliografia

• 1. Aleksandrowicz J, Fiejka M, Kudelski Z i inni. Test LAL w zastosowaniu do badania biologicznie czynnych, niepożądanych substancji w biopreparatach. Med Dośw Mikrobiol 1996; 48: 215-21.
• 2. Aleksandrowicz J, Fiejka M, Marcimak-Rusek A. Poziom endotoksyny bakteryjnej w szczepionkach Haemophilus influenzae typ b skoniugowanych z toksoidami (Te, Di). Med Dośw Mikrobiol 1998; 50: 223-28.
• 3. Aleksandrowicz J, Kudelski Z. Test LAL (Limulus Amoebocyte Lysate) w zastosowaniu do oceny bezpieczeństwa biopreparatów. Roczn PZH 1997; 48: 275-82.
• 4. Cooper JF. BET calculations for multiple component parenterals. LAL Times 1998; 5: 1-5.
• 5. Cooper JF. Documenting validation of a BET application. LAL Times 1999; 6: 1-4.
• 6. Gmeiner J. The isolation of two different Iipopolysaccharide fractions from various Proteus mirabilis strains. Eur J Biochem 1975; 58: 621-26.
• 7. Gorbach SL, Bartlett JG. Anaerobic infections. N Engl J Med 1974; 290: 1177-84.
• 8. Hofstad T. Pathogenicity of anaerobic gram-negative rods: possible mechanisms. Rev Infect Dis 1984; 6: 189-99.
• 9. Hofstad T. Virulence factors in anaerobic bacteria. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 1992; 11: 1044-48.
• 10. Onderdonk Aß, Kasper DL, Cisneros RL i inni. The capsular polysaccharide of Bacteroides fragilis as a virulence factor: comparison of the pathogenic potential of encapsulated and unencapsulated strains. J Infect Dis 1977; 136: 82-89.
• 11. Poxton IR, Edmond DM. Biological activity of Bacteroides lipopolysaccharide: re - appraisaI. Clin Infect Dis 1995; 20(Suppl 2): 149-53.
• 12. Rokosz A. Immunochemiczne właściwości antygenów powierzchniowych Bacteroides thetaiotaomicron. Praca doktorska, Akademia Medyczna w Warszawie, 1988.
• 13. Rokosz A. Grupa Bacteroides fragilis i jej znaczenie w medycynie. Post Mikrobiol 1991; 30: 57-77.
• 14. Rokosz A, Aleksandrowicz J, Fiejka M i inni. Próba zastosowania testu BET (LAL) do oznaczenia biologicznej aktywności lipopolisacharydów i wielocukrów otoczkowych Bacteroides fragilis i Bacteroides thetaiotaomicron. Med Dośw Mikrobiol 2001; 53: 387-94.
• 15. Rokosz A, Marciniak-Rusek J, Aleksandrowicz J i inni. Zastosowanie testu LAL do ilościowego oznaczania endotoksyny Bacteroides fragilis. Med Dośw Mikrobiol 1997; 49: 161-68.
• 16. Rokosz A, Meisel-Mikołajczyk F, Kot K i inni. Analiza kwasów tłuszczowych występujących w lipopolisacharydach Bacteroides thetaiotaomicron i Bacteroides fragilis. Med Dośw Mikrobiol 2001; 53: 177-83.
• 17. Rokosz A, Meisel-Mikołajczyk F, Malchar C i inni. Adhesion molecule expression stimulated by Racteroides thetaiotaomicron cell-surface antigens. Arch Immunol Ther Exp 1999; 47: 169-78.
• 18. Rokosz A, Meisel-Mikołajczyk F, Malchar C i inni. Polysaccharide and lipid components of Bacteroides thetaiotaomicron lipopolysaccharides as stimulators of endothelial adhesion molecule expression. J Endotoxin Res 1999; 5: 287-95.
• 19. Summanen P, Baron EJ, Citron DM i inni. Wadsworth Anaerobic Bacteriology Manual. Star Publishing Company, Belmont, CA, 1993.
• 20. Sveen K, Hofstad T, Milner KC. Lethality for mice and chick embryos, pyrogenicity in rabbits and ability to gelate lysate from amoebocytes of Limulus polyphemus by lipopolysaccharides from Bacteroides, Fusobacterium and Veillonella. Acta Pathol Microbiol Scand B 1977; 85: 388-96.
• 21. Westphal O, Jann K. Bacterial lipopolysaccharides: extraction with phenol-water and further applications of the procedure. Meth Carbohydr Chem 1965; 5: 83-91.