Warianty tytułu
Języki publikacji
Abstrakty
The aim of the study was to adapt the method of selenocysteine content determination elaborated by Jones et al. and Cone et al. for some oxidoreductive enzyme analysis as well as to modify it. Determination was based on usage of conventional amino acid analyzer. Modification consisted in introducing the stage of yeast protein purification from reagents after carboxymethylation process containing selenocysteine with iodoacetic acid according to procedure described by Tappel et al., as well as applying the internal standard during analytical procedure. Application of amino acid analyzer made it possible to separate selenocysteine from other components of the sample analyzed which was sufficient for quantitative measurement. Internal standard used eliminated errors resulting from additional preparation: the necessity for amino acid coupling with iodoacetic acid, purification of complex from the excess of reaction agents as well as inaccuracy commonly made during solution pipetting and dosing onto the chromatographic column.
W pracy opisano badania mające na celu adaptację i usprawnienie metody oznaczania zawartości selenocysteiny w drożdżach selenowych, opracowanej wcześniej przez Jonesa i wsp. oraz Cona'a i wsp. dla pewnych oksydoreduktaz. Modyfikacja polegała na wykorzystaniu do rozdziału chromatograficznego konwencjonalnego analizatora aminokwasów on wprowadzeniu do badanej próby standardu wewnętrznego - norleucyny. Do standardu selenocystyny lub próby liofilizowanych drożdży selenowych zawierających standard wewnętrzny dodawano borowodorek potasu i merkaptoetanol w celu redukcji selenocystyny do selenocysteiny. Następnie próbkę traktowano kwasem jodooctowym dla sprzęgnięcia z selenocysteiną w wyniku czego otrzymywano karboksymetyloselenocysteinę nie ulegającą rozkładowi w czasie hydrolizy białka drożdży. Uzyskany kompleks poddawano oczyszczeniu z nadmiaru odczynników reakcyjnych na kolumnach z kationitem i anionitem. Oczyszczoną próbkę hydrolizowano następnie odparowywano do sucha a pozostałość rozpuszczano w buforze. Aminokwasy uzyskanej mieszaniny poddawano rozdziałowi metodą chromatografii jonowymiennej w analizatorze aminokwasów i oznaczaniu fotometrycznemu jako kompleksy z ninhydryną. Zbierane frakcje eluatu po przejściu przez reaktor analizatora poddawano analizie na zawartość selenu techniką bezpłomieniową ASA (rys.1). Nowa procedura analityczna pozwala na całkowite oddzielenie oznaczanego składnika od pozostałych aminokwasów umożliwiając następnie jego pomiar ilościowy, a zastosowanie wzorca wewnętrznego poprawia precyzję uzyskiwanych wyników (tab. 1, tab. 2).
Wydawca
Rocznik
Tom
Numer
Opis fizyczny
p.15-18,fig.
Twórcy
autor
- University of Agriculture, Akademicka 13, 20-950 Lublin, Poland
autor
autor
Bibliografia
Typ dokumentu
Bibliografia
Identyfikatory
Identyfikator YADDA
bwmeta1.element.agro-article-0fd75d22-5ef1-450c-aad9-c1ea22f19124
JavaScript jest wyłączony w Twojej przeglądarce internetowej. Włącz go, a następnie odśwież stronę, aby móc w pełni z niej korzystać.