Kultury in vitro i krioprezerwacja w zachowaniu różnorodności roślin - standardy dla banku genów

• Autorzy: Mikula A. , Makowski D. , Tomiczak K. , Rybczynski J. J.

Warianty tytułu

EN

In vitro culture and cryopreservation for biodiversity conservation - genebank standards

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Celem pracy jest przedstawienie nowych metod ochrony ex situ zasobów genowych roślin. Pierwsza polega na gromadzeniu materiału roślinnego w warunkach spowolnionego wzrostu kultury in vitro, druga zaś na zabezpieczaniu tkanek roślinnych (zarodków zygotycznych i somatycznych lub ich osi, pąków, wierzchołków wzrostu, merystemów) w ciekłym azocie (-196°C). Metody te uzupełniają tradycyjne sposoby zabezpieczania różnorodności roślin, których nie można gromadzić w postaci nasion. Praca pokazuje postęp w badaniach na przestrzeni minionego stulecia i wykorzystanie zdobytej wiedzy w zachowaniu różnorodności roślin (głównie użytkowych), których wyraźne przyspieszenie nastąpiło dopiero z wejściem w nowe tysiąclecie. Przegląd dostępnej literatury oraz stanu zasobów roślinnych zgromadzonych w wybranych bankach genów wskazuje, że banki tkanek in vitro i ciekłego azotu są ciągle nową praktyką, wymagającą specjalistycznej wiedzy, sprzętu i personelu oraz stosunkowo wysokich nakładów fi nansowych i czasu na opracowywanie procedur mikrorozmnażania i krioprezerwacji. Wypracowane dotychczas standardy ułatwiają rozwijanie tych metod w różnych krajach na całym świecie. Wydaje się, że wysoki poziom bezpieczeństwa, długoterminowość i niski koszt wieloletniego utrzymywania materiału roślinnego w ciekłym azocie oraz współczesne wymogi ochrony zasobów genowych doprowadzą w najbliższej dekadzie do szerszego wykorzystania krioprezerwacji wspomaganej kulturami in vitro.

EN

This paper presents new ex situ conservation methods of plant genetic resources. The fi rst of them consists in maintenance of plant material under slow growth conditions of in vitro culture, and the second one consists in preservation of plant tissue (i.e. zygotic and somatic embryos or its axes, buds, shoot apices and meristems) in liquid nitrogen temperature (-196°C). Both methods improve the traditional conservation tools of plant biodiversity that cannot be stored in the form of seeds. The paper highlights research advances which have been achieved during past century and exploitation of attained knowledge to preservation of plant biodiversity (especially for crop plants). The acceleration of exploitation happened simultaneously with the beginning of the new millennium. A review of available references and of gathered plant resources in world genebanks shows that in vitro and liquid nitrogen tissue banks are still a relatively new practice. Its course requires a specialist knowledge, equipment and staff, and comparatively high expenditure and long time for preparation of micropropagation and cryopreservation procedures. The genebank standards for in vitro culture and cryopreservation that have been developed to date facilitate an implementation of the new methods in different countries over the world. It seems that high safety, longevity and low cost of plant material maintenance in liquid nitrogen for many years in combination with modern requirements of genetic resources protection will lead to escalation of cryopreservation supported by in vitro culture.

• Wydawca: -
• Czasopismo: Polish Journal of Agronomy
• Rocznik: 2013
• Numer: 14
• Opis fizyczny: s.3-17,rys.,bibliogr.

Twórcy

autor

Mikula A.

• Polska Akademia Nauk Ogród Botaniczny, Centrum Zachowania Różnorodności Biologicznej w Powsinie, ul.Prawdziwka 2, 02-973 Warszawa

autor

Makowski D.

• Polska Akademia Nauk Ogród Botaniczny, Centrum Zachowania Różnorodności Biologicznej w Powsinie, ul.Prawdziwka 2, 02-973 Warszawa

autor

Tomiczak K.

• Polska Akademia Nauk Ogród Botaniczny, Centrum Zachowania Różnorodności Biologicznej w Powsinie, ul.Prawdziwka 2, 02-973 Warszawa

autor

Rybczynski J. J.

• Polska Akademia Nauk Ogród Botaniczny, Centrum Zachowania Różnorodności Biologicznej w Powsinie, ul.Prawdziwka 2, 02-973 Warszawa

Bibliografia

• Ahuja S., Mandal B.B., Dixit S., Srivastava P.S., 2002. Molecular, phenotypic and biosynthetic stability in Dioscorea floribunda plants derived from cryopreserved shoot tips. Plant Sci., 163: 971-977.
• Altman A., Loberant B., 1997. Micropropagation: clonal plant propagation in vitro. ss. 19-42. W: Agricultural Biotechnology; ed.: A. Altman. New York, Basel, CRC Press.
• Angel F., Barney V.E., Tohme J., Roca W.M., 1996. Stability of cassava plants at the DNA level after retrieval from 10 years of in vitro storage. Euphytica, 90: 307-313.
• Ashmore S.E., 1997. Status report on the development and application of in vitro techniques for the conservation and use of plant genetic resources. IPGRI, Rome.
• Barnicoat H., Cripps R., Kendon J., Sarasan V., 2011. Conservation in vitro of rare and threatened ferns – case studies of biodiversity hotspot and island species. In Vitro Cell. Dev. – Plant, 47: 37-45.
• Benson E.E., 2004. Cryoconserving Algal and Plant Diversity: Historical Perspectives and Future Challenges. ss. 299-328. W: Life in the Frozen State; eds: B.J. Fuller , N. Lane, E.E. Benson, Boca Raton London New York Washington, D.C.
• Benson E.E., 2008. Cryopreservation Theory. ss. 15-32. W: Plant Cryopreservation: A Practical Guide; ed.: B.M. Reed, Springer.
• Benson E.E., Harding K., Debouck D., Dumet D., Escobar R., Mafla G., Panis B., Panta A., Tay D., van den Houwe I., Roux N., 2011a. Refinement and standardization of storage procedures for clonal crops - Global Public Goods Phase 2: Part I. Project landscape and general status of clonal crop in vitro conservation technologies. ss. 1-82. W: System-wide Genetic Resources Programme, Rome, Italy.
• Benson E.E., Harding K., Debouck D., Dumet D., Escobar R., Mafla G., Panis B., Panta A., Tay D., van den Houwe I., Roux N., 2011b. Refinement and standardization of storage procedures for clonal crops - Global Public Goods Phase 2: Part II. Status of in vitro conservation technologies for: Andean root and tuber crops, cassava, Musa, potato, sweetpotato and yam. ss. 1-106. W: System-wide Genetic Resources Programme, Rome, Italy.
• Berjak P., Bartels P., Benson E.E., Harding K., Mycock D.J., Pammenter N.W., Sershen V.B., Wesley-Smith J., 2011. Cryoconservation of South African plant genetic diversity. In Vitro Cell. Dev. Biol. – Plant, 47: 65-81.
• Brzuchnalski K., Kozioł C., 2012. Gromadzenie kolekcji leśnych gatunków drzewiastych i dziko rosnących roślin zielnych w Leśnym Banku Genów Kostrzyca. ss. 21-22. W: Program i streszczenia prezentacji V Ogólnopolskiej Konferencji Zasobów Genowych Roślin pt. „Roślinne zasoby genowe biologiczną podstawą rozwoju rolnictwa”, 11-14.09.2012, Rogów.
• Castillo N.R.F., Bassil N.V., Wada S., Reed B.M., 2010. Genetic stability of cryopreserved shoot tips of Rubus germplasm. In Vitro Cell. Dev. Biol. – Plant, 46: 246-256.
• Chmielarz P., 2005. Zachowanie zasobów genowych zagrożonych i ginących gatunków metodami kriogenicznymi w leśnym banku genów. Projekt badawczy zlecony przez Dyrekcję Generalną Lasów Państwowych, realizowany w latach 2005-2010.
• Chmielarz P., 2010. Cryopreservation of the non-dormant orthodox seeds of Ulmus glabra. Acta Biol. Hungar., 61: 224-233.
• Chmielarz P., Michalak M., Pałucka M., Wasileńczyk U. 2011. Successful cryopreservation of Quercus robur plumules. Plant Cell Rep., 30: 1405-1414.
• Chmielarz P., Walters C., 2007. Desiccation sensitivity of white and black oak embryonic axes. S. Afr. J. Bot., 73(3): 498.
• CIAT, Kolumbia 2012. http://isa.ciat.cgiar.org/urg/cassavacollection.do 8.10.2012.
• CIP, Lima, Peru 2012. http://www.cipotato.org/ 8.10.2012.
• Crop Genebank Knowledge Base - CGIAR 2012. http://cropgenebank.sgrp.cgiar.org/ 12.10.2012.
• Cyr D.R., 1999. Cryopreservation of embryogenic cultures of conifers and its application to clonal forestry. ss. 239-261. W: Somatic Embryogenesis in Woody Plants. Vol. 4; eds: S.M. Jain, P.K. Gupta, R.J. Newton, Kluwer Acad. Publ., Dordrecht, Boston, London, The Netherlands.
• DeVerno L.L., Park Y.S., Bonga J.M., Barrett J.D., 1999. Somaclonal variation in cryopreserved embryogenic clones of white spruce [Picea glauca (Moench) Voss.]. Plant Cell Rep., 18: 948-953.
• Dixit S., Mandal B.B., Ahuja S., Srivastava P.S., 2003. Genetic stability assessment of plants regenerated from cryopreserved embryogenic tissues of Dioscorea bulbifera L. using RAPD, biochemical and morphological analysis. CryoLetters, 24: 77-84.
• Engelmann F., 2011. Cryopreservation of embryos: an overview. ss. 155-184. W: Plant embryo culture: methods and protocols. Methods in molecular biology. vol. 710; eds: T.A. Thorpe, E.C. Yeung, Springer Science+Business Media, LLC.
• Engelmann F., Engels J.M.M., 2002. Technologies and strategies for ex situ conservation managing plant genetic diversity. ss. 89-103. W: Managing Plant Genetic Diversity; eds: J.M.M. Engels, V. Ramanatha Rao, A.H.D. Brown, M.T. Jackson. CAB International and IPGRI, Wallingford and Rome.
• Engels J.M.M., Visser L., 2003. Genebank management procedures. ss. 60-79. W: A guide to effective management of germplasm collections. IPGRI Handbooks for Genebanks No. 6; eds: J.M.M. Engels, L. Visser, IPGRI, Rome, Italy.
• Fabre J., Dereuddre J., 1990. Encapsulation-dehydration: a new approach to cryopreservation of Solanum shoot tips. CryoLetters, 11: 413-126.
• Faltus M., Vagner M., 2011. Country report: Czech Republic. Proceedings of the final meeting „Cryopreservation of crop species in Europe”. COST Action 871. ss. 180-183; eds: A. Grapin, E.R.J. Keller, P.T. Lynch, B. Panis, A.R. Bahillo, F. Engelmann. Agrocampus Ouest INHP, Angers, France, 8-11.02.2011.
• FAO, 2010. The state of ex situ conservation. ss. 55-90. W: The second report on the state of the world’s plant genetic resources for food and agriculture. Food and Agriculture Organization of the United Nations, Rome, Italy, http://www.fao.org/ docrep/013/i1500e/i1500e.pdf
• FAOstat, 2010. Food and Agriculture Organization of the United Nations: http://faostat.fao.org/site/339/default.aspx 1.10.2012.
• Fernandes P., Rodriguez E., Pinto G., Roldán-Ruiz I., De Loose M., Santos C., 2008. Cryopreservation of Quercus suber somatic embryos by encapsulation-dehydration and evaluation of genetic stability. Tree Physiol., 28: 1841-1850.
• Fort Collins, Colorado, 2012. http://www.ars.usda.gov/main/ site_main.htm?modecode=54-02-05-00 8.10.2012.
• Frozen Ark Project, 2012. http://www.frozenark.org/ 12.10.2012.
• Fuller B.J., 2004. Cryoprotectants: the essential antifreezes to protect life in the frozen state. CryoLetters, 25: 375-388.
• Garming H., Roux N., Van den houwe I., 2010. The impact of the Musa International Transit Centre. W: Impact assessment brief number 4. Biodiversity International. Rome, Italy. http://www.bioversityinternational.org/fileadmin/bioversity/ publications/pdfs/ 1439_The%20impact%20of%20the%20 Musa%20International%20Transit%20Centre.pdf?cache=1349632121 19.10.2012.
• Gonzalez-Arnao M.T., Panta A., Roca W.M., Escobar R.H., Engelmann F., 2008. Development and large scale application of cryopreservation techniques for shoot and somatic embryo cultures of tropical crops. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 92: 1-13.
• González-Benito M.E., Martín C., 2011. In vitro preservation of Spanish biodiversity. In vitro Cell. Dev. Biol. – Plant, 47: 46-54.
• Harvengt L., Meier-Dinkel A., Dumas E., Collin E., 2004. Establishment of a cryopreserved gene bank of European elms. Can. J. For. Res., 34: 43-55.
• Hummer K.E., Reed B.M., 2000. Establishment and operation of a temperate clonal field genebank. ss. 29-31. W: Management of field and in vitro germplasm collections. Proceedings of a consultation meeting, 15–20.01.1996, CIAT, Cali, Colombia; ed.: F. Engelmann, IPGRI, Rome.
• IPK, Gatersleben, 2012. http://www.ipk-gatersleben.de/en/dept- -genebank/ 8.10.2012.
• Kaczmarczyk A., Turner S.R., Bunn E., Mancera R.L., Dixon K.W., 2011. Cryopreservation of threatened native Australian species – what have we learned and where to from here? In Vitro Cell Dev. Biol. – Plant, 47: 17-25.
• Kaity A., Ashmore S.E., Drew R.A., 2009. Field performance evaluation and genetic integrity assessment of cryopreserved papaya clones, Plant Cell Rep., 28: 1421-1430.
• Kaity A., Ashmore S.E., Drew R.A., Dulloo M.E., 2008. Assessment of genetic and epigenetic changes following cryopreservation in papaya, Plant Cell Rep., 27: 1529-1539.
• Keller E.R.J., Kaczmarczyk A., Senula A., 2008. Cryopreservation for plant genebanks: a matter between high expectations and cautious reservation. CryoLetters, 29: 53-62.
• Keller E.R.J., Senula A., Dreiling M., 2005. Genebanking of vegetatively propagated medicinal plants - two cases: Allium and Mentha. ISHS Acta Horticult., 676: 103-109.
• Keller E.R.J., Senula A., Leunufna S., Grube M., 2006. Slow growth storage and cryopreservation-tools to facilitate germplasm maintenance of vegetatively propagated crops and living plant collections. Int. J. Refrig., 29: 411-417.
• Keller E.R.J., Senula A., Zanke C., Grübe M., Kaczmarczyk A., Nukari A., Teyssedre D., Morales C.K., Edesi J., Pelc M., Olas-Sochacka M., 2011. Ways of collaboration – COST short-term scientific missions on three crops and their outcomes – potato, garlic and mint. ss. 110-115. W: Proceedings of the final meeting. Cryopreservation of crop species in Europe. Agrocampus oust INHP, Angers – France, February 08.11.2011.
• Krishnan P.N., Decruse S.W., Radha R.K., 2011. Conservation of medicinal plants of Western Ghats, India and its sustainable utilization through in vitro technology. In Vitro Cell. Dev. Biol. – Plant, 47: 110-122.
• KU Leuven, Belgia 2012. http://www.biw.kuleuven.be/DTP/ TRO/_data/plantphysiology. htm#cryopreservationofmeristemcultures 8.10.2012.
• Li D.Z., Pritchard H.W., 2009. The science and economics of ex situ plant conservation. Trends Plant Sci., 14: 614-621.
• Lovelock J.E., Bishop M.W.H., 1959. Prevention of freezing damage to living cells by dimethyl sulfoxide. Nature, 183: 1394-1395.
• Luyet B.J., Gehenio P.M., 1938. The survival of moss vitrified in liquid air and its relation to water content. Biodynamica, 2: 1-7.
• Luyet B.J., Gehenio P.M., 1940. Life and death at low temperatures. Biodynamica. Normandy, Missouri, 341 ss.
• Luyet B.J., Hodapp, E.L., 1938. Revival of frog’s spermatozoa vitrified in liquid air. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 39: 433-434.
• Martín C., Cervera M.T., González-Benito M.E., 2011. Genetic stability analysis of chrysanthemum (Chrysanthemum × morifolium Ramat) after different stages of an encapsulation– dehydration cryopreservation protocol. J. Plant Physiol., 168: 158-166.
• Martín C., González-Benito M.E., 2005. Survival and genetic stability of Dendranthema grandiflora Tzvelev shoot apices after cryopreservation by vitrification and encapsulation-dehydration. Cryobiology, 51: 281-289.
• Mikuła A., 2008. Krioprezerwacja jako metoda zachowania zdolności życiowych komórek i tkanek roślinnych. Biotechnologia, 2(81): 41-57.
• Mikuła A., 2010. Krioprezerwacja w zabezpieczaniu (epi)genetycznej stabilności materiału roślinnego. Biotechnologia, 2(89): 23-37.
• Mikuła A., Makowski D., Walters C., Rybczyński J.J., 2011a. Exploration of cryo-methods to preserve tree and herbaceous fern gametophytes. ss. 173-192. W: Working with ferns: issues and applications; eds: H. Fernández, A. Kumar, M.A. Revilla. Springer.
• Mikuła A., Rybczyński J.J., 2006. Krioprezerwacja narzędziem długoterminowego przechowywania komórek, tkanek i organów pochodzących z kultur in vitro. Biotechnologia, 4(75): 145-163.
• Mikuła A., Tomiczak K., Rybczyński J.J., 2011b. Cryopreservation enhances embryogenic capacity of Gentiana cruciata (L.) suspension culture and maintains (epi)genetic uniformity of regenerants. Plant Cell Rep., 30: 565-574.
• Moukadiri O., Lopes C.T., Cornejo M.J., 1999. Physiological and genomic variations in rice cells recovered from direct immersion and storage in liquid nitrogen, Physiol Plant., 105: 442-449.
• Nag K.K., Street H.E., 1973. Carrot embryogenesis from frozen cultured cells. Nature, 245: 270-272.
• Nash T., 1966. Chemical constitution and physical properties of compounds able to protect living cells against damage due to freezing and thawing. ss. 179-211. W: Cryobiology; ed.: H.T. Meryman, Academic Press, New York.
• Niino T., 1995. Cryopreservation of germplasm of mulberry (Morus species). ss. 102-113. W: Biotechnology in Agriculture and Forestry. Vol. 32; ed.: Y.P.S. BAJAJ, Berlin, Heidelberg: Springer-Verlag.
• Olas-Sochacka M., 2012. Długoterminowe zabezpieczanie zasobów genowych czosnku pospolitego (Allium sativum L.) w kriobanku genów. s. 28. W: Program i streszczenia prezentacji V Ogólnopolskiej Konferencji Zasobów Genowych Roślin pt. „Roślinne zasoby genowe biologiczną podstawą rozwoju rolnictwa”. 11-14.09.2012, Rogów.
• Pawłowska B., 2012. Krioprezerwacja rodzimych gatunków róż dla zachowania biologicznej różnorodności. Rozpr. habil. 375, Zesz. Nauk. UR Kraków, 498: 1-143.
• Pence V.C., 2000. Cryopreservation of in vitro grown fern gametophytes. Am. Fern J., 90: 16-23.
• Pence V.C., 2011. Evaluating costs for the in vitro propagation and preservation of endangered plants. In Vitro Cell. Dev. Biol. – Plant, 47: 176-187.
• Pence C., Sandoval J.A., Villalobos V.M., Engelmann F., 2002. In vitro collecting techniques for germplasm conservation. ss. 1-100. Technical bulletin No. 7. IPGRI, Rome, IT.
• Pennisi E., 2010. Tending the global garden. Science, 329: 1274- 1277.
• Polge C., Smith A.N., Parkers A.S., 1949. Revival of spermatozoa after vitrification and dehydration at low temperatures. Nature, 164: 666-669.
• RDA, Suvon, Republika Korei, 2012. http://www.genebank.go- .kr/eng/plant/introduction.jsp 8.10.2012.
• Reed B.M., 2008. Plant Cryopreservation: a practical guide. New York, NY: Springer, 513 ss.
• Reed B.M., Engelmann F., Dulloo M.E., Engels J.M.M., 2004. Technical guidelines for the management of field and in vitro germplasm collections. 106 ss. Handbooks for Genebanks No. 7. IPGRI, Rome, IT.
• Riviere J.N., Hivert J., Schmitt L., Derroire G., Sarrailh J.M., Baret S., 2008. Role of tree ferns in flowering plant settlement in the tropical montane rainforests of La Reunion (Mascarene Archipelago, Indian Ocean). Rev. Ecol.-Terre Vie, 63: 199-207.
• Rybczyński J., Mikuła A., 2011. Gametophyte culture and its application for vegetative propagation of tree ferns. ss. 135- 148. W: Working with ferns: issues and applications; eds: H. Fernández, A. Kumar, M.A. Revilla, Springer.
• Sakai A., 2004. Plant cryopreservation. ss. 329-345. W: Life in the Frozen State; eds: B. Fuller, N. Lane, E.E. Benson, CRC Press, London, New York.
• Sakai A., Kobayashi S., Oiyama I., 1990. Cryopreservation of nucellar cells of navel orange (Citrus sinensis Osb. var. brasiliensis Tanaka) by vitrification. Plant Cell Rep., 9: 30-33.
• Sánchez C., Martínez M.T., Vidal N., San-José M.C., Valladares S., Vieitez A.M., 2008. Preservation of Quercus robur germplasm by cryostorage of embryogenic cultures derived from mature trees and RAPD analysis of genetic stability. CryoLetters, 29: 493-504.
• Schäfer-Menuhr A., Schumacher H.M., Mix-Wagner G., 1997. Cryopreservation of potato cultivars – design of method for routine application in genebanks, Acta Hortic., 447: 447-482.
• Smyda P., 2011. Zastosowanie kriokonserwacji do przechowywania zasobów genowych ziemniaka. Ziemniak Pol., 2: 12-15.
• Son H.S., Chun Y.W., Hall R.B., 1991. Cold storage of in vitro cultures of hybrid poplar shoots (Populus alba L. x P. grandidentata Michx.). Plant Cell Tiss. Org. Cult., 27: 161-168.
• Stout D., 1982. Investigations into the freezing of plants [First English Translation of ‘Untersuchungen über Das Erfrieren der Pflanzen’ Monograph by H. Molisch, 1897]. CryoLetters, 3: 331-390.
• Touchell D.H; Walters C., 2000. Recovery of embryos of Zizania palustris following exposure to liquid nitrogen. CryoLetters, 21: 261-270.
• Towill L.E., Ellis D.D., 2008. Cryopreservation of dormant buds. ss. 421-442. W: Plant cryopreservation: a practical guide; ed.: B.M. Reed, Springer.
• Turner S.R., Senaratna T., Bunn E., Tan B., Dixon K.W., Touchell D.H., 2001. Cryopreservation of shoot tips from six endangered Australian species using a modified vitrification protocol. Ann. Bot., 87: 371-378.
• Urbanová M., Košuth J., Čellárová E., 2006. Genetic and biochemical analysis of Hypericum perforatum L. plants regenerated after cryopreservation, Plant Cell Rep., 25: 140-147.
• van den Houwe I., Roux N., Escalant J.-V., Markham R., 2004. Safe exchange of Musa germplasm, knowledge of the genome and its application in Musa improvement. ss. 217-230. W: Advancing banana and plantain R&D in Asia and the Pacific - Vol 13. Proceedings of the 3rd BAPNET Steering Committee meeting held in Guangzhou, China, 23- 26.11.2004; eds: A.B. Molina, L.B. Xu, V.N. Roa, I. Van den Bergh, K.H. Borromeo.
• Walters C., Wheeler L., Stanwood P.C., 2004. Longevity of cryogenically stored seeds. Cryobiology, 48: 229-244.
• Wang Q.C., Panis B., Engelmann F., Lambardi M., Valkonen J.P.T., 2009. Cryotherapy of shoot tips: a technique for pathogen eradication to produce healthy planting materials and prepare healthy plant genetic resources for cryopreservation. Ann. Appl. Biol., 154: 351-363.
• Wasilewicz-Flis I., Hara-Skrzypiec A., Smyda P., Strzelczyk-Żyta D., Jakuczun H., 2012. Wykorzystanie zasobów genowych ziemniaka diploidalnego. s. 36. W: Program i streszczenia prezentacji V Ogólnopolskiej Konferencji Zasobów Genowych Roślin pt. „Roślinne zasoby genowe biologiczną podstawą rozwoju rolnictwa”. 11-14.09.2012, Rogów.
• Wildt D.E., 1992. Genetic Resource Banks for conserving wildlife species. justification, examples and becoming organized on a global basis. Anim. Reprod. Sci., 28: 247-257.
• Wilkinson T., Wetten A., Prychid C., Fay M.F., 2003. Suitability of cryopreservation for the long-term storage of rare and endangered plant species: a case history for Cosmos atrosanguineus. Ann. Bot., 91: 65-74.
• Withers L.A., 1979. Freeze preservation of somatic embryos and clonal plantlets of carrot (Daucus carota). Plant Physiol., 63: 460-467.
• Withers L.A., King P.J., 1980. A simple freezing unit and routine cryopreservation method for plant cell cultures. CryoLetters, 1: 213-220.