EN
Synthesis of extracellular lipases by Candida antarctica was induced by adding fat or oil to the culture medium. The highest lipase activity (9.1 U) was obtained after 72 h of cultivation of yeast in medium supplemented with 2% (v/v) l,2,3-trioleoyl-sn-glycerol. On the basis of SDS-PAGE analysis, Candida antarctica synthesized two forms of lipase having molecular weight of 36 and 52 kDa. Lipase from Candida antarctica showed the highest activity at pH 8.0 and temperature of 35°C and was stable in this range of temperature and pH. Activity of Candida antarctica lipase was higher on substrates having short-chain and medium-chain fatty acids than on these containing long-chain fatty acids. Using Candida antarctica lipase immobilized on Celite 545 for the synthesis of monoacylglycerols, 100% of conversion was obtained after esterification of oleic acid with isopropylidene glycerol. After hydrolysis of protected monoacylglycerols with trifluoroacetic acid, pure monoacylglycerols were obtained.
PL
Celem niniejszej pracy byla synteza i charakterystyka surowego preparatu lipaz z Candida antarctica (CAL) oraz sprawdzenie jego zdolności do katalizowania reakcji syntezy monoacylogliceroli. Obecność w pożywce tłuszczu lub oleju indukowała drożdże Candida antarctica do syntezy zewnątrzkomórkowych lipaz. Najwyższą aktywność lipaz (9.1 U) uzyskano po 72 godz. hodowli drożdży w pożywce z 2% (y/w) dodatkiem 1,2,3-trioleinoilo-sn-glicerolu (rys. 2). Na podstawie analizy SDS-PAGE wykazano, że drożdże Candida antarctica syntetyzowały dwie lipazy o masach cząsteczkowych 36 i 52 kDa (rys. 3). Lipazy z Candida antarctica charakteryzowały się najwyższą aktywnością i stabilnością aktywności w pH 8.0 i temperaturze 35°C (rys. 4, 5). Aktywność lipaz z Candida antarctica była wyższa w reakcjach z substratami zbudowanymi z krótkołańcuchowych i średniołańcuchowych kwasów tłuszczowych, niż z estrami długołańcuchowych kwasów tłuszczowych (rys. 6). Stosując lipazy z Candida antarctica immobilizowane na Celite 545 do syntezy monoacylogliceroli uzyskano 100% wydajność estryfikacji kwasu oleinowego z izopropylodieno glicerolem (rys. 7). Po hydrolizie kompleksów acetonoidowych w roztworze kwasu trifluorooctowego uzyskano czyste monoacyloglicerole. Wyniki uzyskane w prezentowanej pracy zachęcają do prowadzenia dalszych badań nad wykorzystaniem CAL. Następne prace będą dotyczyły opracowania ciągłych metod syntezy MAG z wykorzystaniem różnych kwasów tłuszczowych lub estrów winylowych kwasów tłuszczowych (FAVE), w reakcjach prowadzonych w obecności rozpuszczalników organicznych lub bez ich udziału.