Zastosowanie butylowanego hydroksytoluenu w kriokonserwacji nasienia knura

• Autorzy: Trzcinska M. , Bryla M.

Warianty tytułu

EN

The use of butylated hydroxytoluene in cryopreservation of boar semen

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Celem przeprowadzonych badań było określenie wpływu dodatku butylowanego hydroksytoluenu (BHT) do rozcieńczalnika mrożeniowego na jakość plemników knura oraz ich zdolność zapładniającą po procedurze zamrażania-rozmrażania. Nasienie pochodzące od 5 knurów (36 ejakulaty) kriokonserwowano w rozcieńczalniku żółtkowo-laktozowo-glicerolowym uzupełnionym różnymi stężeniami BHT: 0 mM (kontrola); 1,0 mM (R1); 1,5 mM (R2); 2,0 mM (R3). Jakość nasienia po rozmrożeniu oceniano na podstawie: ruchliwości plemników (CASA; ruch całkowity – TM, ruch postępowy – PM), translokacji fosfatydyloseryny (Annexin-V-FLuos Staining Kit) oraz stopnia fragmentacji DNA (TUNEL Assay). Jednocześnie kriokonserwowane nasienie użyto do inseminacji loszek, a zdolność zapładniającą plemników określano na podstawie skuteczności inseminacji oraz liczby prawidłowych morfologicznie zarodków ocenianych na podstawie stopnia fragmentacji DNA. Najwyższy odsetek plemników o ruchu postępowym oraz plemników żywych stwierdzono w rozcieńczalniku R3 (74,8 ±4,4% oraz 63,7 ±5,8%) w porównaniu z rozcieńczalnikiem kontrolnym (38,3 ±2,8% oraz 36,1 ±2,6%). Jednocześnie stwierdzono, że dodatek BHT do rozcieńczalnika mrożeniowego nie indukuje wzrostu odsetka plemników wczesnoapoptotycznych po rozmrożeniu, w porównaniu z rozcieńczalnikiem kontrolnym. Niezależnie od zastosowanego rozcieńczalnika mrożeniowego, procedura zamrażania-rozmrażania nie indukuje fragmentacji DNA w plemnikach knura. Najwyższą liczbę zarodków prawidłowych morfologicznie uzyskano od loszek inseminowanych nasieniem kriokonserwowanym w rozcieńczalniku z dodatkiem 1,5 mM BHT. Nie wykazano różnic w jakości zarodków, ocenianych na podstawie stopnia fragmentacji DNA, uzyskanych od loszek inseminowanych nasieniem mrożonym w badanych rozcieńczalnikach.

EN

The objective of the study was to determine the effect of butylated hydroxytoluene (BHT) on the quality and fertilizing capacity of frozen-thawed (FT) boar semen. Semen from five boars (36 ejaculates) was resuspended in lactose-egg yolk-glycerol extender supplemented with 0 (control), 1.0 (R1), 1.5 (R2) or 2.0 mM BHT (R3). Sperm quality was assessed based on motility (CASA; TM: total motility; PM: progressive motility), phosphatidylserine (PS) translocation across the plasma membrane (Annexin-V-FLuos Staining Kit) and DNA fragmentation (TUNEL Assay). The FT semen was also used for intrauterine artificial insemination (AI) of synchronized gilts. The fertilizing capacity of the FT semen was assessed on the basis of the gilt insemination rate and the number of morphologically normal embryos. The quality of the preimplantation embryos was determined by observing a TUNEL-positive reaction. The highest percentage of progressive motile and viable spermatozoa was noted in extender R3 (74.8 ±4.4% and 63.7 ±5.8%), as compared with the control (38.3 ±2.8% and 36.1 ±2.6%). The addition of BHT to the extender did not increase early apoptotic changes in the frozen-thawed spermatozoa with respect to the control. Irrespective of the variant of the extender, cryopreservation and thawing did not induce fragmentation in the boar spermatozoa. The highest number of morphologically normal embryos from inseminated gilts was observed in the case of semen cryopreserved in extender supplemented with 1.5 mM BHT. No significant differences were observed in DNA fragmentation in the expanded blastocysts from gilts inseminated with FT semen cryopreserved in the extenders analysed.

Słowa kluczowe

PL

rozrod zwierzat; trzoda chlewna; knury; nasienie; kriokonserwacja; butylohydroksytoluen; jakosc plemnikow; zdolnosc zapladniajaca

• Wydawca: -
• Czasopismo: Roczniki Naukowe Polskiego Towarzystwa Zootechnicznego
• Rocznik: 2016
• Tom: 12
• Numer: 2
• Opis fizyczny: s.21-28,tab.,bibliogr.

Twórcy

autor

Trzcinska M.

• Dział Biotechnologii Rozrodu Zwierząt, Instytut Zootechniki - Państwowy Instytut Badawczy, ul.Krakowska 1, 32-083 Balice

autor

Bryla M.

• Dział Biotechnologii Rozrodu Zwierząt, Instytut Zootechniki - Państwowy Instytut Badawczy, ul.Krakowska 1, 32-083 Balice

Bibliografia

• 1. BAMBA K., CRAN D.G., 1992 – Effects of treatment with butylated hydroxytoluene on the susceptibility of boar spermatozoa to cold stress and dilution. Journal of Reproduction and Fertility 95, 69-77.
• 2. BRYŁA M., TRZCIŃSKA M., WIECZOREK J., SŁOMSKI R., SMORAG Z., 2010 – Effect of semen quality in transgenic boars on the developmental competence of preimplantation embryos. Animal Reproduction Science 118, 77-82.
• 3. CHANAPIWAT P., KAEOKET K., TUMMARUK P., 2009 – Effects of DHA-enriched hen egg yolk and L-cysteine supplementation on quality of cryopreserved boar semen. Asian Journal of Andrology 11, 600-608.
• 4. FRASER L., STRZEŻEK J., 2007 – Is there a relationship between the chromatin status and DNA fragmentation of boar spermatozoa following of boar spermatozoa following freezing- -thawing? Theriogenology 68, 248-257.
• 5. GADEA J., SELLÉS E., MARCO M.A., COY P., MATAS C., ROMAR R., RUIZ S., 2004 – Decrease in glutathione content in boar sperm after cryopreservation: effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Theriogenology 62, 690-701.
• 6. IJAZ A., HUSSAIN A., ALEEM M., YOUSAF M.S., REHMAN H., 2009 – Butylated hydroxytoluene inclusion in semen extender improves the postthawed semen quality of Nili- Ravi buffalo (Bubalus bubalis). Theriogenology 71, 1326-1329.
• 7. KHALIFA T.A., LYMBEROPOULOS A.G., EL-SAIDY B.E., 2008 – Testing usability of butylated hydroxytoluene in conservation of goat semen. Reproduction of Domestic Animals 43, 525-530.
• 8. MARTIN G., SABIDO O., DURAND P., LEVY R., 2004 – Cryopreservation induces an apoptosis-like mechanism in bull sperm. Biology of Reproduction 71, 28-37.
• 9. NEAGU V.R., GARCÍA B.M., SANDOVAL C.S., RODRÍGUEZ A.M., FERRUSOLA C.O., FERNÁNDEZ L.G., TAPIA J.A., PENA F.J., 2010 – Freezing dog semen in presence of the antioxidant butylated hydroxytoluene improves postthaw sperm membrane integrity. Theriogenology 73, 645-650.
• 10. PEÑA F.J., JOHANNISSON A., WALLGREN M., RODRIGUEZ-MARTINEZ H., 2003 – Assessment of fresh and frozen–thawed boar semen using an Annexin-V assay: a new method of evaluating sperm membrane integrity. Theriogenology 60, 677-689.
• 11. ROCA J., GIL M.A., HERNANDEZ M., PARRILLA I., VAZQUEZ J.M., MARTINEZ E.A., 2004 – Survival and fertility of boar spermatozoa after freeze-thawing in extender supplemented with butylated hydroxytoluene. Journal of Andrology 25, 397-405.
• 12. SHOAE A., ZAMIRI M.J., 2008 – Effect of butylated hydroxytoluene on bull spermatozoa frozen in egg yolk-citrate extender. Animal Reproduction Science 104, 414-418.
• 13. TRZCIŃSKA M., BRYŁA M., 2015 – Apoptotic-like changes of boar spermatozoa in freezing media supplemented with different antioxidants. Polish Journal of Veterinary Sciences 18, 473-480.
• 14. TRZCIŃSKA M., BRYŁA M., GAJDA B., 2014 – Domaciczna inseminacja loszek przy użyciu kriokonserwowanego nasienia knura. Zespół Wydawnictw i Poligrafii IZ PIB, Kraków.
• 15. TRZCIŃSKA M., BRYŁA M., GAJDA B., GOGOL P., 2015 – Fertility of boar semen cryopreserved in extender supplemented with butylated hydroxytoluene. Theriogenology 83, 307-313.
• 16. TRZCIŃSKA M., BRYŁA M., GOGOL P., CEGŁA M., 2013 – Kriokonserwacja nasienia knura. Zespół Wydawnictw i Poligrafii IZ PIB, Kraków.