Pozyskiwanie przeciwciał klasy Y z jaj kur immunizowanych epitopem białka Efb ze Staphylococcus aureus

• Autorzy: Walczak M. , Lupicka-Slowik A. , Nowak D. , Sienczyk M.

Warianty tytułu

EN

Generation of IgY antibodies isolated from eggs of hens immunized with epitope of Efb protein from Staphylococcus aureus

• Języki publikacji: PL

Abstrakty

PL

Immunoglobuliny Y pozyskiwane z żółtek kurzych jaj, ze względu na nieinwazyjną i wydajną metodę izolacji, stanowią interesującą alternatywę dla powszechnie stosowanych ssaczych przeciwciał klasy G. Kurze IgY nie wykazują reaktywności wobec czynnika reumatoidalnego, nie wiążą się z receptorami FC oraz składnikami ludzkiego układu dopełniacza. Dlatego też ich zastosowanie istotnie ogranicza możliwość uzyskiwania fałszywie pozytywnych wyników w testach serologicznych, które często obserwowane są w przypadku stosowania ssaczych przeciwciał klasy G. Celem przedstawionych badań było otrzymanie przeciwciał IgY skierowanych wobec epitopu białka Efb do zastosowań w diagnostyce infekcji Staphylococcus aureus. Immunizację przeprowadzono przy użyciu koniugatu peptydowego fragmentu białka Efb obejmującego reszty 145–162 z białkiem nośnikowym (KLH), natomiast do określenia reaktywności otrzymanych przeciwciał zastosowano koniugat Efb(145–162)-BSA. Izolację przeciwciał IgY z żółtek jaj przeprowadzono, stosując metodę wytrącania glikolem polietylenowym (PEG 6000). Wydajność izolacji wyniosła około 120 mg IgY/żółtko, natomiast czystość otrzymanych przeciwciał mieściła się w zakresie 85–95%. Dalsze oczyszczanie na drodze filtracji żelowej pozwoliło na istotne zwiększenie ich czystości. Przeprowadzona analiza wykazała produkcję specyficznych przeciwciał IgY.

EN

Due to noninvasive and inexpensive method of isolation, IgY antibodies extracted from chicken egg yolks represent an attractive alternative to widely used mammalian IgG antibodies. Avian IgYs are considered as valuable diagnostic tools since they lack reactivity with rheumatoid factor and human complement, which significantly reduces the number of false positive results often obtained in IgG-based serological assays. The aim of this study was to generate IgY antibodies that specifically recognize selected epitope of Efb protein produced exclusively by Staphylococcus aureus species. The selected epitope spanning residues 145–162 conjugated to KLH carrier protein was found as an efficient antigen allowing to generate peptide-specific IgY antibodies of high titer (5 µg/ml), high isolation yield (120 mg per egg yolk) and purity (85–95%). Developed Efb epitope-specific IgYs could potentially serve as an interesting diagnostic agent for the detection of Staphylococcus aureus infections.

Słowa kluczowe

PL

przeciwciala; immunoglobuliny; immunoglobuliny IgY; pozyskiwanie przeciwcial; zoltko jaja; immunizacja; Staphylococcus aureus; bialko Efb

EN

antibody; immunoglobulin; IgY antibody; egg yolk; immunization; Staphylococcus aureus; Efb protein

• Wydawca: -
• Czasopismo: Acta Scientiarum Polonorum. Medicina Veterinaria
• Rocznik: 2013
• Tom: 12
• Numer: 1
• Opis fizyczny: s.17-28 ,rys.,bibliogr.

Twórcy

autor

Walczak M.

• Zakład Chemii Medycznej i Mikrobiologii, Wydział Chemiczny, Politechnika Wrocławska, Wybrzeże Wyspiańskiego 27, 50-370 Wrocław

autor

Lupicka-Slowik A.

• Politechnika Wrocławska, Wrocław

autor

Nowak D.

• Politechnika Wrocławska, Wrocław

autor

Sienczyk M.

• Politechnika Wrocławska, Wrocław

Bibliografia

• Attallah A.M., Abbas A.T., Ismail H., Abdel-Raoul M., El-Dosoky I., 2009. Efficacy of Passive Im-munization with IgY Antibodies to a 58-kDa H. pylori Antigen on Severe Gastritis in BALB/c Mouse Model. J. of Immunoass. Immunoch., 30(4), 359-377.
• Bade H., Stegemann H., 1984. Rapid method of extraction of antibodies from hen egg yolk. J. Im¬munol. Methods., 72(2), 421-426.
• Barkas T., Watson M.J., 1979. Induction of an Fc conformational change by binding of antigen: the generation of protein A-reactive sites in chicken immunoglobulin. Immunology, 36, 557-561.
• Boden W.M.K., Flock J.I., 1995. Incidence of the highly conserved fib gene and expression of the fibrinogen-binding (Fib) protein among clinical isolates of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 33(9), 2347-2352.
• Camenisch G., Tini M., Chilov D., Kvietikova I., Srinivas V., Caro J., Spielmann P., Wenger R.H., Gassmann M., 1999. General applicability of chicken egg yolk antibodies: the performance of IgY immunoglobulins raised against the hypoxia-inducible factor 1a. FASEB J., 13, 81-88.
• Carlander D., Kollberg H., Wejäker P., Larsson A., 2000. Peroral Immunotheraphy with Yolk Anti-bodies for the Prevention and Treatement of Enteric Infections. Immunol. Res., 21, 1-6.
• Colque-Navarro P., Söderquist B., Holmberg H., Blomqvist L., Olcen P., Möllby R., 1998. Anti¬body response in Staphylococcus aureus septicaemia - a prospective study. J. Med Microbiol., 47(3), 217-225.
• Elazab M.F. A., Fukushima Y., Horiuchi H., Matsuda H., Furusawa S., 2009. Prolonged Suppression of Chick Humoral Immune Response by Antigen Specific Maternal Antibody. J. Vet. Med. Sci., 71, 417-421.
• Ferella A., Bellido D., Chacana P., Wigdorovitz A., Dus Santos M.J., Mozgovoj M.V., 2012. Chicken egg yolk antibodies against bovine respiratory syncytial virus neutralize the virus in vitro. Pro¬cedia Vaccinol., 6, 33-38.
• Hussain M., von Eiff C., Sinha B., Joost I., Herrmann M., Peters G., Becker K., 2008. eap Gene as novel target for specific identification of Staphylococcus aureus., 46(2), 470-6.
• Ko K.Y., Ahn D.U., 2007. Preparation of immunoglobulin Y from egg yolk using ammonium sul¬fate precipitation and ion exchange chromatography. Polutry Sci., 86(2), 400-407.
• Lambris J.D., 1988. The multifunctional role of C3, the third component of complement. Immunol. Today 9(12), 387-393.
• Lee L.Y.L., Liang X.W., Hook M., Brown E.L., 2004. Identification and characterization of the C3 binding domain of the Staphylococcus aureus extracellular fibrinogen-binding protein (Efb). J. Biol. Chem. 279(49), 50710-50716.
• Leslie G.A., Clem L.W., 1969. Phylogeny of immunoglobulin structure and function. III. Immuno-globulins of the chicken. J. Exp. Med., 130, 1337-1352.
• McLaren R.D., Prosser C.G., Grieve C.J., Borissenko M., 1994. The use of caprylic acid for the extraction of the immunoglobulin fraction from egg yolk of chicken immunized with ovine a-lactalbumin. J. Immunol. Methods, 177, 175-184.
• Mayo S., Carlsson H.E., Zagon A., Royo F., Hau J., 2009. Enhancement of anamnestic immunospe- cific antibody response in orally immunized chickens. J. Immunol. Methods, 342, 58-63.
• Meenatchisundaram S., Michael A., Subbraj T., Diraviam T., Shanmugam V., 2011. Isolation, Puri-fication and Neutralizing potential of chicken egg yolk immunoglobulin (IgY) agains mastitis causin Escherichia coli in dairy cows in Coimbatore District. IJDDR, 3(2), 147-153.
• Michael A., Meenatchisundaram S., Parameswari G., Subbraj T., Selvakumaran R., Ramalingam S., 2010. Chicken egg yolk antibodies (IgY) as an alternative to mammalian antibodies. Indian J. Sci. Technol., 3(4), 468-474.